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新規に開発した分化モデルによるM細胞特異的分子の探索と機能解明

使用新开发的分化模型寻找 M 细胞特异性分子并阐明其功能

基本信息

批准号：
07J10978
负责人：
金谷高史
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

<パイエル板リンパ球によるM細胞分化誘導作用の解析>昨年度の研究において、申請者が樹立したマウス腸管上皮細胞株であるMIE細胞のM細胞分化には、パイエル板リンパ球中の活性化T細胞とB細胞の両方が重要な役割を果たすことを明らかにした。本年度は、活性化T細胞とB細胞のM細胞分化誘導作用についての解析を行った。活性化T細胞はCD40リガンドを発現し、B細胞に発現するCD40に作用することでB細胞の活性化を促すことが知られている。そこでCD40を介したB細胞の活性化によるM細胞分化誘導作用を解析した。パイエル板リンパ球に抗CD40抗体を添加することによりB細胞の活性化を促し、MIE細胞と共培養を行った。その結果、M細胞分化は観察されなかった。このことより、M細胞分化は活性化T細胞の作用によるB細胞の活性化によって誘導されるのではなく、活性化T細胞およびB細胞によって作り出される特殊な微小環境によって誘導される可能性が示唆された。<M細胞分化因子の同定>昨年度の研究において、抗CD3/CD28抗体を添加して培養を行ったパイエル板リンパ球の培養上清にM細胞分化誘導活性が存在することを明らかにした。本年度は、このパイエル板リンパ球培養上清に含まれるM細胞分化因子の同定を試みた。抗CD3/CD28抗体を加えて培養を行ったパイエル板リンパ球の培養上清とM細胞分化誘導活性のない、抗CD3/CD28抗体を添加せずに作製したパイエル板リンパ球の培養上清に含まれるタンパク質の抽出および濃縮を行った。調製したタンパク質サンプルの2次元電気泳動を行い、M細胞分化誘導活性を有する、抗CD3/CD28抗体を加えて培養を行ったパイエル板リンパ球の培養上清中に多く含まれるタンパク質のスポット解析を行った。その結果、5個のタンパク質スポットに着目し、これらのタンパク質がM細胞分化誘導活性を有するタンパク質の候補であることが推測された。

<Analysis of M Cell Differentiation Induction in Cell Culture> In the previous year's study, the applicant established an intestinal epithelial cell line to induce M cell differentiation in MIE cells. This year, the analysis of activated T cells, B cells and M cells differentiation induction was carried out. CD40 activation in activated T cells and CD40 activation in activated B cells Analysis of CD40-mediated activation of B cells and induction of M cell differentiation The addition of anti-CD40 antibody to the culture medium promotes the activation of B cells and co-culture of MIE cells. M cell differentiation was observed. The differentiation of activated T cells and activated B cells may be induced by special microenvironment. <M cell differentiation factor identity> Last year's study showed that anti-CD3/CD28 antibodies were added to culture supernatant of M cell differentiation inducing activity in culture plates. This year, we tested the identity of M cell differentiation factor in the supernatant of the culture of the mouse embryo. Anti-CD3/CD28 antibody is added to culture supernatant and M cell differentiation-inducing activity. Anti-CD3/CD28 antibody is added to culture supernatant. The modulation of CD3/CD28 antibody in the culture supernatant of CD3/CD28 cells, the induction of M cell differentiation activity, and the analysis of CD3/CD28 antibody in the culture supernatant of CD3/CD28 cells. The results showed that 5 of them were candidates for M cell differentiation-inducing activity.