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肝再生ならびに肝疾患時におけるビトロネクチンの糖鎖構造変化と組織修復の調節

玻连蛋白在肝再生和肝病过程中聚糖结构变化和组织修复的调节

基本信息

批准号：
07J12995
负责人：
佐野琴音
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

肝再生時に産生されるビトロネクチン(VN)の糖鎖構造変化に伴う分子の高次構造変化が、細胞接着伸展活性や細胞周囲での局所的溶解反応に及ぼす影響を明らかにした。非手術(NO)、シャム手術(SH)、または部分肝切除手術から24時間後(PH)のラット血漿からVNを精製した。VNのGlu-C消化糖ペプチドをLC/MS^n解析した結果、VNと同様に肝臓で主に産生されるフィブロネクチンには見られない混成型糖鎖を含む部位特異的なN-型糖鎖付加と、タンデムなオリゴシアル酸構造を持つO-型糖鎖の存在を見出した。このオリゴシアル酸糖鎖がPH-VNで著しく減少することにより、分子の等電点が大きく塩基性シフトすることを見出した。これらのVN糖鎖変化か細胞接着に及ぼす影響を探るため、肝炎症時に活性化して細胞外マトリックスを産生する肝星細胞(RSC)を用いて細胞接着伸展活性測定とシグナル伝達活性測定を行った。その結果、NO-,SH-VNを基質とする場合と比較してPH-VN上での伸展が50%減少し、細胞内のFocal adhesion kinaseのチロシンリン酸化レベルが約60%に低下することを見出した。またノイラミニダーゼ処理VN上でも同様にRSC伸展が激減したことから、VN糖鎖中のシアル酸がRSCのインテグリン仲介性接着伸展に寄与することが示された。またVNと1型プラスミノゲン活性化因子阻害因子(PAI-1)の共存下におけるウロキナーゼ(uPA)有効活性はPH-VNで増加したが、さらに部分肝切除手術72時間後の血漿中のプラスミン活性はRSC存在下で著しく増強されることを見出した。これはRSC表面に存在するuPA受容体へのVNの結合活性の増強により、局所的な溶解反応が促進されるためと考えられた。VNの糖鎖変化による組織修復の調節機構を解明することは、正常な修復または線維化進展の制御に繋がると考えられる。

During liver regeneration, there are changes in the glycostructure of VN, accompanied by changes in the molecular structure, cell extension activity, and the dissolution of cellular structures. Non-operative (NO), partial hepatectomy (SH), partial hepatectomy (PH) and plasma purification LC/MS^n analysis of VN Glu-C digested sugar showed that the presence of O-type glycans was detected in the presence of site-specific N-type glycans and in the presence of site-specific acid structures. The molecular isoelectric point of the molecule is reduced by the pH value of the molecule. To detect the effect of VN glycogen on the proliferation of hepatic stellate cells (RSCs), to determine the activity of VN glycogen on the proliferation of hepatic stellate cells (RSCs), and to determine the activity of VN glycogen. As a result, NO-,SH-VN matrix stretch was reduced by 50% compared to PH-VN, and intracellular Focal adhesion kinase was reduced by about 60% compared to PH-VN. The RSC stretch is stimulated by the VN sugar chain, and the RSC stretch is mediated by the VN sugar chain. The activity of uPA was increased in plasma 72 days after partial hepatectomy. The activity of uPA was also increased in the presence of RSC. The binding activity of VN in the presence of uPA receptor on the surface of RSC is enhanced by the presence of uPA receptor on the surface of RSC. The regulation mechanism of tissue repair in VN carbohydrate lock is explained, and the control mechanism of normal repair is examined.