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培養中枢神経細胞におけるaSセリン129リン酸化キナーゼの解析

培养中枢神经细胞中 aS 丝氨酸 129 磷酸化激酶的分析

基本信息

批准号：
07J52144
负责人：
原進
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J52144/
关键词：
脳神経疾患神経科学

项目摘要

パーキンソン病(PD)は、中年以降に発症する神経変性疾患である。PD全体の90-95%は、明らかな遺伝を示さない孤発性PD(sPD)である。精力的な研究が行われているが、sPDの発症機構の詳細は解明されていない。sPDを病理学的・生化学的に特徴づけるレビー小体(LB)の主要構成成分α-シヌクレイン(αS)は、種々の翻訳後修飾を受ける。LBでは、大部分のαSの129番目のセリン残基がリン酸化されていることが明らかになっている。αSセリン129のリン酸化は、αSの重合化及び細胞毒性の発揮に重要な働きを担っていることが、in vitroとin vivoの解析より示されている。このリン酸化反応を司る候補キナーゼとして、カゼインキナーゼIとII、Gタンパク質共役型受容体キナーゼ(GRK)ファミリーのGRK2とGRK5が知られている。しかし、GRKファミリー分子がとの程度αSセリン129のリン酸化に寄与しているのか不明である。本研究は、種々の細胞で発現が確認されているGRKファミリー(GRK2,3,5,6)に焦点を当て、内因性レベルでこれらキナーゼのαSセリン129リン酸化反応に対する寄与を検討した。方法として、野生型αSを安定的に発現したヒト胎児腎細胞由来のHEK293細胞及びヒト神経芽細胞腫由来のSH-SY5Y細胞において、RNA干渉法を用いてGRKファミリー分子の発現を抑制し、αSセリン129のリン酸化反応の変化の有無を検索した。HEK293細胞において、各GRK分子に対する合成siRNAのトランスフェクションにより、コントロールsiRNAをトランスフェクションした場合に比べ、90%以上の標的分子の発現抑制を認めた。この発現抑制下で、各GRK分子の効果を比べると、αSセリン129のリン酸化反応は、GRK3及びGRK6の発現抑制によって有意な減少を示していた。SH-SY5Y細胞では、siRNAのトランスフェクションによって、各GRK分子は50%以上発現抑制された。この条件において、αSセリン129リン酸化反応は、GRK3、GRK5、さらにGRK6の発現抑制によって有意に減少していた。この結果から、培養細胞間でαSセリン129のリン酸化反応に寄与するGRK分子に違いがあること、神経系培養細胞では、GRK3、GRK5、GRK6が内因性レベルでαSセリン129のリン酸化反応に寄与していることが示唆された。今後、各キナーゼの寄与を明確にすることはsPDの治療標的として神経細胞死を抑制するαSのリン酸化阻害剤の開発に重要な知見を与えると考えられる。本研究成果は、神経科学の国際学会である「Society for Neuroscince2007」で発表した。

A mental illness that occurs in middle age. 90-95% of PD population is isolated PD(sPD). The detailed explanation of the mechanism of sPD and the mechanism of sPD is given in this paper. Pathological and biochemical characteristics of sPD include the main components of LB, α-S, and post-translational modifications. Most of the αS residues in LB were acidified.αS protein 129 release, αS recombination and cytotoxicity development are important factors in the analysis of α S protein in vivo. The candidate for this acidification reaction is GRK 2 and GRK5. The candidate is GRK2 and GRK5. The degree of acidification of GRK molecules is unknown. In this study, we confirmed that GRK gene expression (GRK2,3,5,6) was the focus of the gene expression, and discussed the mechanism of the gene expression. Methods: The stable development of wild type αS in HEK293 cells derived from fetal kidney cells and SH-SY5Y cells derived from fetal neuroblastoma was studied. RNA stem cell method was used to inhibit the development of GRK protein molecules and to detect the presence or absence of αS protein in 129 cells. In HEK293 cells, the expression of synthetic siRNAs for each GRK molecule was inhibited by more than 90% of the target molecules. Under the inhibition of GRK, the effect of GRK, αS, GRK 129, GRK3 and GRK6 was reduced intentionally. SH-SY5Y cells were inhibited by more than 50% of GRK molecules in response to siRNA. These conditions include: αS, αS, The results showed that GRK molecules were involved in the regulation of αS gene 129 in cultured cells, GRK3, GRK5 and GRK6 in cultured cells of nervous system. In the future, we will clarify the treatment target of sPD and the development of αS acidification inhibitor. The results of this study were presented in the International Society for Neuroscience 2007.