過形成副甲状腺に対する遺伝子導入とアポトーシス誘導に関する分子生物学的研究

增生性甲状旁腺基因转移和细胞凋亡诱导的分子生物学研究

• 批准号: 18689020
• 负责人: 椎崎 和弘
• 金额: $ 10.23万
• 依托单位: Jichi Medical University (2007)Wakayama Medical University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18689020/
• 关键词: 慢性腎不全; 二次性副甲状腺機能亢進症; 遺伝子導入; ビタミンD受容体; Ca感知受容体; アポトーシス; Ca感受受容体

基礎的研究に有用な副甲状腺細胞のcell lineなどがないため、遺伝子導入を用いて標的遺伝子または遺伝子産物の過剰発現や発現の抑制による副甲状腺細胞の変化を検討する研究方法を確立するため、アデノウイルスをベクターとした遺伝子導入システムを開発した。さまざまな濃度のアデノウイルスを副甲状腺内に直接注入し、経時的に副甲状腺を摘出し、副甲状腺細胞におけるアデノウイルスの感染状況を検討することで、至適ウイルス濃度と効果を検討するための至適なタイミングを明らかにした。これらの結果をもとに、vitamin D receptor(VDR)およびCa-sensing receptor (CaSR)のcDNAを導入したアデノウイルスを副甲状腺細胞に感染させ、これらの遺伝子産物の副甲状腺細胞における発現量と機能の変化を検討した。なお、コントロールとしてLacZを導入したアデノウイルスを用いた。免疫組織化学的手法により、これらのウイルスが感染した副甲状腺では、これらの発現も著明に増加していることが確認された。また、前者ではビタミンDに、後者ではCaに対する副甲状腺の感受性の改善もみられ、導入した標的遺伝子または遺伝子産物の機能も確認された。さらに、これらの遺伝子を導入後、それぞれビタミンDまたはCaの投与後に副甲状腺細胞のアポトーシス誘導の変化について、TUNEL染色、DNA電気泳動、電子顕微鏡による形態学的評価により検討した。これらの治療を受けた副甲状腺では、TUNEL陽性副甲状腺細胞数が有意に高値であり、DNA電気泳動および電子顕微鏡的に副甲状腺細胞のapoptosis誘導が確認された。こうした変化はビタミンDやCaの投与量に依存して増加していた。本研究により、遺伝子導入を用いて標的遺伝子または遺伝子産物の過剰発現や発現の抑制による副甲状腺細胞の変化を検討する研究方法を確立することができた。さらに副甲状腺細胞の機能の調節に重要な役割を持つビタミンDやCaとアポトーシスの関係も明らかにすることができた。

Basic research has been conducted to establish a method for studying parathyroid cell transformation by using cell line and gene introduction as target gene products and inhibiting the development of gene products. To investigate the infection status of parathyroid cells when injected directly into the parathyroid gland, to investigate the optimal concentration of parathyroid cells and to investigate the optimal effect of parathyroid extraction. As a result, vitamin D receptor(VDR) and Ca-sensing receptor (CaSR) cDNAs were introduced into parathyroid cells to infect them, and the expression and function of these cDNA products in parathyroid cells were discussed. The first time I saw him was when I was a kid. Immunohistochemical methods were used to confirm the presence of parathyroid infection. The former is to improve the sensitivity of parathyroid gland and the latter is to confirm the function of target gene product. After the introduction of these genes, the morphological evaluation of parathyroid cells was studied by TUNEL staining, DNA electrophoresis and electron microscopy. The number of TUNEL-positive parathyroid cells was intentionally high, DNA electrophoresis and electron microscopy confirmed. The amount of Ca added to the solution is dependent on the amount of Ca added. In this study, we established a method for studying the development of parathyroid cells by detecting the expression and inhibition of gene products in target genes. The regulation of parathyroid cell function is very important.

项目成果

Direct injection of calcitriol or its analog into hyperplastic parathyroid glands induces apoptosis of parathyroid cell.

将骨化三醇或其类似物直接注射到增生的甲状旁腺中可诱导甲状旁腺细胞凋亡。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Kidney International 70 Supple,102
• 作者: Shiizaki K;Negi S;Hatamura I;Tatsuta K;Shibata M;Shimada S;Sakaguchi T et al.
• 通讯作者: Sakaguchi T et al.