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神経幹細胞の増殖と分化のスイッチングを制御する機構の解析

神经干细胞增殖与分化的控制机制分析

基本信息

批准号：
18700365
负责人：
清水健史
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700365/
关键词：
神経前駆細胞増殖分化 FGF GSK3β Notch β-catenin 細胞分裂神経分化

项目摘要

増殖と分化の相反する性質は一般的な細胞系譜制御の根本原理のーつである。すなわち増殖の盛んな中枢神経系前駆細胞は未分化状態を保ったまま数を増やすが、ひとたび細胞周期をはずれた前駆細胞はニューロンやグリアへと分化する。しかしながら、増殖と分化を同調させる分子メカニズムについて未だ不明な点が多い。神経幹細胞を再生医療で使用する際に、細胞数とニューロンへの分化をコントロールする上で、その分子メカニズムの理解は重要である。昨年度までに我々は、FGF2シグナルによって神経上皮細胞の増殖が促進される際に働く主要な経路として、PI3K-Akt経路を介したGSK3βの不活性化によるCyclinD1の発現上昇を明らかにしてきた。またFGF2が細胞の未分化性を維持する分子メカニズムとして、PI3K-Akt-GSK3β経路を介して、Notchシグナルの標的であるHes遺伝子発現を増強し、細胞分化抑制に働くことを見出した。平成19年度には、我々は新たにGSK3βの不活化の後、β-cateninタンパク質がNotch1細胞内領域と直接相互作用することを見い出した。その際、β-cateninとNotch1細胞内領域の複合体は、転写のcoactivatorであるp300やP/CAFとも結合し、その結果Hes1プロモーターが活性化される分子機構を新たに明らかにした。またクロマチン免疫沈降法によって、β-cateninタンパク質が実際にHes1プロモーターに結合することを確かめた。次に、生体内における細胞系譜への影響を調べる目的で、子宮内電気穿孔法を用いてGSK3の機能を解析した。その結果、GSK3ノックダウン細胞が脳室周囲に限局したことから、GSK3が神経前駆細胞の未分化性維持を制御する可能性が示唆された。これらの結果から、増殖と分化を同調させる分子メカニズムのーつが明らかになった。

The differentiation of colonies is contrary to that of sex, and the general system of cell lines is based on the basic principle. The cells of the central god line are not differentiated. They are not differentiated. The differentiation of colonies and colonies is the same as that of molecules. In regenerative medicine, we use the number of cells, and the number of cells. Last year, we were informed by FGF2 that the epithelial cells were proliferated to promote the proliferation of major pathways, PI3K-Akt pathways, GSK3 β, inactivation, CyclinD1, and so on. The undifferentiated cells of FGF2 cells maintain the molecular markers, the PI3K-Akt-GSK3 β pathway, the Hes genes of Notch genes, the inhibition of cell differentiation and the inhibition of cell differentiation. After the inactivation of GSK3 β in Pingcheng in 1919, the direct interaction in the intracellular domain of β-catenin and Notch1 was detected. The complex of the intracellular domain of β-catenin Notch1, the combination of coactivator, p300 and P/CAF, and the results of Hes1 were used to activate the molecular machinery. Immuno-sedimentation assay (immuno-sedimentation assay) and β-catenin immunoassay (β-PCR) were used in combination with the combination of immunoprecipitation and β-Hes1 immunoassay. In vivo and in vivo, the cell system was used to determine the target, and the in-cell electron perforation method was used to analyze the data by means of GSK3. The results showed that the possibility of undifferentiated maintenance of the cell cycle of the GSK3, the cell cycle of the limited office, and the possibility of undifferentiated maintenance of the cell in the pre-cell of the GSK3 were significantly affected. The results showed that the differentiation and differentiation of colonies were the same as those of other genes.