短時間の虚血再潅流による酸化ストレスを介した肝細胞保護作用の制御・機序

短时缺血再灌注氧化应激介导的肝细胞保护作用的调控及机制

• 批准号: 19590749
• 负责人: 手島 一陽
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590749/
• 关键词: 移植・再生医療; 酸化ストレス; 活性酸素ラジカル(ROS); 虚血再灌流障害; Ischemic preconditioning; Kupffer細胞; 脂質過酸化; 生理活性脂質

短時間の虚血再灌流が先行すると、その後の長時間の虚血再灌流障害が軽減されるという現象:Ischemic preconditioning(IP)の効果発現において、本年度は、IPによって細胞外に産生された活性酸素ラジカルが、1)細胞膜を構成するリン脂質の過酸化反応を惹起しているか否か、2)特に肝細胞の脂質過酸化が生じているか否か、また、3)その脂質過酸化反応がIPの効果発現に寄与しているか否か、についての検討を行った。まず、脂質過酸化定量法であるTBARS assay上、IP直後の肝組織において有意なMDA濃度上昇が認められ、IPにより肝の脂質過酸化が惹起されていることが捉えられた。更に、このIPによる肝組織中のMDA濃度上昇は、Kupffer細胞を抑制、または、superoxide dismutase(SOD)を経静脈的に前投与したラットにおいては認められず、この脂質過酸化反応が、Kupffer細胞により細胞外に産生された活性酸素ラジカルによって惹起されていることが示唆された。次に、このIPによる脂質過酸化の主座が肝細胞であるか否かについて、抗MDAモノクローナル抗体を用いた免疫組織染色による組織学的検討を行った結果、肝細胞特異的な染色陽性部が認められ、同所見もKupffer細胞の抑制ないしSOD前投与によって消失することが確認された。従って、IPにより肝細胞の脂質過酸化が惹起されていることが示唆された。これらの結果を踏まえ、脂質過酸化反応が、実際にIPの効果発現に寄与しているか否かについて、次に我々は、脂質過酸化反応の初期に活性化し、これを制御するPhospholipase A_2(PLA_2)に着目した検討を行った。前述のTBARS assayを用い、IPによって惹起されるMDA濃度上昇が抑制され得るcPLA_2阻害剤(AACOCF_3)の至適前投与プロトコールが、現在までの検討で確立された為、今後、同阻害実験においてIPの肝保護作用が消失するか否かを検討して行きたい。

Short-term hypoperfusion is preceded by long-term hypoperfusion, and the impairment of long-term hypoperfusion is reduced. This year, the effect of Ischemic preconditioning(IP) is reduced. The extracellular production of IP is reduced. 1) The lipid hyperacidification of cell membrane is reduced. 2) The lipid hyperacidification of hepatocytes is reduced. 3) The effect of IP is reduced. The lipid peroxidation assay was used to detect the increase of MDA concentration in liver tissue directly after IP. In addition, the increase in MDA concentration in liver tissue due to this IP inhibits Kupffer cells, and the forward delivery of superoxide dismutase(SOD) into the veins is also due to this lipid peroxidation reaction, which is caused by the active acid produced extracellularly by Kupffer cells. The results of histological analysis using immunohistochemical staining with anti-MDA antibodies against lipid peroxidation in hepatocytes were confirmed. The positive staining sites specific to hepatocytes were identified. The inhibition of SOD in Kupffer cells was also confirmed. The lipid peroxidation of liver cells caused by IP was investigated. The results showed that the lipid peracidification reaction was initiated and the effect of IP was observed in the early stage of lipid peracidification reaction. Phospholipase A_2(PLA_2) was also investigated. In the TBARS assay mentioned above, the increase of MDA concentration caused by IP was suppressed and the cPLA_2 inhibitor (AACOCF_3) was established in the present study. In the future, the liver protective effect of IP was eliminated.

项目成果

Sublethal oxidative stress induces hepatic ischemic tolerance via NADPH oxidase in Kupffer cells.

亚致死氧化应激通过 Kupffer 细胞中的 NADPH 氧化酶诱导肝缺血耐受。

• 发表时间: 2007
• 作者: Tejima K;Arai M;Ikeda H;Tomiya T;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Induction of ischemic tolerance in rat liver via reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase in Kupffer cells

通过库普弗细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的还原诱导大鼠肝脏缺血耐受

• 发表时间: 2007
• 期刊: World J Gastroenterol 13
• 作者: Tejima K;Arai M;Ikeda H;Tomiya T;Yanase M;Inoue Y;Nishikawa T;Watanabe N;Ohtomo N;Omata M;Fujiwara K.
• 通讯作者: Fujiwara K.

Ischemic preconditioning in liver pathophysiology

• DOI: 10.1111/j.1440-1746.2006.04656.x
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
• 影响因子: 4.1
• 作者: Arai, Masahiro;Tejima, Kazuaki;Fujiwara, Kenji
• 通讯作者: Fujiwara, Kenji