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siRNAを用いた肺高血圧治療法の開発

使用 siRNA 开发肺动脉高压治疗

基本信息

批准号：
19590927
负责人：
永谷憲歳
金额：
$ 2.91万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590927/
关键词：
核酸シグナル伝達循環器・高血圧発現抑制薬理学

项目摘要

肺動脈性肺高血圧症は、肺血管内皮細胞の機能障害により肺動脈の収縮や肺血管内皮・平滑筋細胞の増殖を来たす難治性疾患である。既存の治療薬は血管拡張を主な作用点としており、治療抵抗例が存在するため、我々は治療のターゲットを主たる病因である肺動脈の血管内皮・血管平滑筋細胞の増殖へ転換する必要があると考えた。肺高血圧症では、細胞増殖・分化を制御するMAPKシグナリングが病態へ関与していると考えられており、まずこのシグナル蛋白であるMEKを標的としたsiRNAをデサインし、その効果を確認した。ラットMEK1および2の双方に相同性をもつ21merのsiRNAを合成し、培養ラット血管平滑筋細胞(A7r5)にリポフェクションさせ、標的遺伝子、蛋白の抑制効率をそれぞれ定量的Real time PCR法、Western blotting法により検討したところ、siRNA濃度が1nMの低濃度でも85%以上の抑制効率を示し、また濃度10nMにおける経時的検討では少なくとも96時間以上その抑制効果が持続していた。次に、このsiRNAの血管平滑筋細胞に対する増殖抑制効果を、MAPKカスケードを下流とする増殖因子であるPDGF-BB刺激下にMTS assayを用いて検討したところ、siRNA濃度依存的に血管平滑筋細胞の増殖が抑制されていた。さらに、アポトーシス誘導効果をカスパーゼ3および7の細胞内活性を測定し検討したところ、やはり濃度依存的にアポトーシス誘導が起こっていた。以上より、我々のデザインした合成siRNAはラノト血管平滑筋細胞の標的蛋白合成を効率的に阻害し、期待された増殖抑制およびアポトーシス誘導の表現型を示すことが証明された。現在、このsiRNAを脂質化合物を用いて生体内での安定性を確保した薬物送達システムを開発中であり、ラット肺高血圧モデルを用いて標的となる肺動脈への導入効率を検討する予定である。

Pulmonary exercise-induced pulmonary hypertension and pulmonary vascular endothelial cell transplantation can prevent the proliferation of pulmonary vascular endothelial smooth muscle cells in order to treat sexual diseases. In the existing treatment of blood vessels, the main point of action, the treatment of resistance cases, the existence of etiology, lung movement, vascular endothelial vascular smooth tendons, cell proliferation, necessary and necessary. Pulmonary hypertension, cellular differentiation, control, MAPK, histopathology, pathology, pathology, protein, siRNA "MEK1", "2" homology, "21mer" siRNA synthesis, "culture"vascular smooth muscle cells" (A7r5) "vascular smooth muscle cells", "protein" inhibition "rate" quantitative Real time PCR method, Western blotting method "low" 1nM "more than 85% inhibition", If you do not need to pay more than 96 hours during the 10nM crash, you will be able to keep the weather in check. Secondary, siRNA, vascular smooth muscle cells, cell colonization inhibition, MAPKs, proliferation factors, PDGF-BB stimulation, MTS assay, vascular smooth muscle cells, siRNA-dependent vascular smooth muscle cells, proliferation inhibition. The results show that the intracellular activity is measured, and the temperature is dependent on the temperature. Above, we need to synthesize siRNA, the protein synthesis rate of vascular smooth muscle cells is blocked, and we expect that the protein synthesis rate of vascular smooth muscle cells will be blocked. At present, siRNA fatty compounds are used to ensure that they are stable in vivo to ensure that the products are delivered. In the middle of the day, when you are in the middle of the operation, the lung is high in blood. You have a high blood pressure in the lungs. You have to use the drug to determine the rate of entry into the lung.