Crm1複合体の解析による肝細胞癌発癌機構およびその治療法の解明

Crm1复合物分析阐明肝癌发生机制及治疗方法

• 批准号: 19790962
• 负责人: 榎本 武治
• 金额: $ 2.34万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790962/
• 关键词: 癌; 蛋白質

肝細胞癌は肝臓にできる悪性腫瘍である原発性肝癌の約95%を占める疾患であり,原因としてB型肝炎,C型肝炎ウイルスが関係すると考えられている.世界的には、アジアとアフリカを中心として3億5千万人も持続感染しているB型肝炎ウイルスが原因となる肝細胞癌の患者数の方が,C型肝炎ウイルスよりまだ圧倒的に多いのが現状である.その原因として,B型肝炎ウィルスによる肝細胞癌発癌機構に最も関与することが報告されているタンパク質であるHepatitis B virus X proteinその機序としてタンパク質を核から細胞質へ輸送するという重要な機序に関わる核外輸送因子Crm1複合体がHBxを細胞質に輸送し,中心体分裂に不安定性を引き起こし発癌することが報告されている.ヌクレオフォスミン(NPM/B23)は5量体(オリゴマー)を形成する非常に安定したタンパク質であり,核と細胞質を往復し正常細胞では核内で見られる頻度が最も高い.以前より中心体分裂に関与することが知られていたが,最近になりNPMの細胞質への輸送能はCrm1複合体によってコントロールされていることが報告された.以上より,Crm1複合体に関わる二つのタンパク質がcomplexを形成することにより肝細胞癌発癌機構制御に大きく関わり,治療に応用される可能性が示唆される.HBxとNPMの接合部位の同定:pcDNA3myc3NPMとpcDNA3flag3HBxを作成し,この両タンパク質が結合する可能性があることが示唆された.現在,NPMとHBxの接合部位の同定のため,NPMの変異体を作成し細胞にpcDNA3flag3HBxと共発現させ,抗Flag抗体にて免疫沈降し,HBxとNPMに対する抗体でWestern blotting法を用いて接合部位の同定を行っている.Crm1複合体陰性作用下におけるHBxおよびNPMの局在:Crm1複合体に対して特異的に陰性の作用を示すLeptomicin Bの投与下に、HBxおよびNPMの局在についてを確認するため、pcDNA3myc3NPMとpcDNA3flag3HBxを細胞内で過剰発現させた.共焦点レーザースキャン顕微鏡を用いてその局在を同定した.

Hepatocellular carcinoma accounts for about 95% of primary liver cancer, and the causes include hepatitis B and hepatitis C. The number of patients with hepatocellular carcinoma (HCC) and the number of hepatitis C patients infected with hepatitis B are estimated to be 350 million worldwide. The mechanism of Hepatitis B virus X protein protein expression in hepatocellular carcinoma is reported to be the most important mechanism for the development of hepatocellular carcinoma. NPM/B23 is the most frequently observed in normal cells. In the past, the central body division was related to the transmission of information, but recently, the transmission of information from the cytoplasm of NPM to Crm1 complex was reported. The Crm1 complex is related to the formation of two kinds of protein complexes, and the possibility of therapeutic use is indicated. The identification of the junction site between HBx and NPM: pcDNA3 myc3NPM pcDNA3 flag 3HBx, and the possibility of binding of two kinds of protein complexes are indicated. Now,NPM and HBx binding site identification,NPM variant production, cell pcDNA3flag3HBx co-discovery, anti-Flag antibody immuno-precipitation,HBx and NPM antibody Western blotting method in the binding site identification, Crm1 complex negative effect, HBx and NPM in: Crm1 complex specific negative effect, Leptomicin B administration and lower, HBx and NPM in the detection, pcDNA3myc3NPM pcDNA3flag3HBx intracellular detection. A common focal point is a mirror.