卵巣癌細胞株におけるHSV-tkとGCVを用いた遺伝子治療の抗腫瘍効果の検討

HSV-tk 和 GCV 基因治疗在卵巢癌细胞系中的抗肿瘤作用研究

• 批准号: 19791156
• 负责人: 田中 綾一
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791156/
• 关键词: 卵巣癌; 遺伝子治療; チミジンキナーゼ; ガンシクロビル

近年,単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-tk)を用いた遺伝子治療が前立腺癌や脳腫瘍などで試みられ始めたが,この治療法の可能性を卵巣癌に応用した研究を行っている。卵巣癌に対する抗腫瘍効果を確認するために,卵巣癌細胞株であるKF細胞株を使用し以下の順に研究を進めた。HSV-tk geneの卵巣癌細胞株KFへの導入:HSV-tk輸送作用のあるvectorを用いKF細胞株にリポフェクタミン法でHSV-tk geneをtransfectionし,細胞内でHSV-tkを発現させた。In vitroにおけるGCV至適濃度の決定:HSV-tk発現KF細胞株をRPMI1640medium中で培養後,ガンシクロビル(GCV)を0.5%,1%,3%,5%,10%の異なる濃度にて培養液中に投与した結果,細胞を死滅させる効果を認めたのは1%以上の濃度である事が確認でき,この実験系でのGCVの最低殺細胞濃度は1%であると決定した。また,HSV-tkを発現していないwild KF細胞株に対しては殺細胞効果を認めなかった。In vitroにおけるHSV-tkのbystander effectの確認:wild KF細胞株とHSV-tk発現KF細胞株を様々な比率で混合培養した培養液中に,GCVを1%の濃度で投与し2日間培養した後の細胞数はHSV-tk発現KF細胞株の割合が多い程減少する傾向が認められ,減少率は混合培養の際のHSV-tk発現KF細胞株数の比率をはるかに超えた結果が得られた。この結果は細胞間のgap junctionを通じ隣接するwild type細胞にも殺細胞効果をもたらすbystander effectの存在の可能性を示唆させた。現在上記のin vitroの効果をin vivoで確認するためにマウスを用いた研究を進行中である。

近年来，使用单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）的基因疗法已开始尝试用于前列腺癌和脑肿瘤，并且已对卵巢癌的潜在治疗进行了研究。为了确认对卵巢癌的抗肿瘤作用，使用了KF细胞系（卵巢癌细胞系），并按以下顺序进行研究。将HSV-TK基因引入卵巢癌细胞系KF：HSV-TK基因通过脂肪tk胺使用具有HSV-TK转运效应的载体转移到KF细胞系中，并且在细胞中表达HSV-TK。确定最佳的GCV浓度在体外：在RPMI1640培养基中孵育表达HSV-TK-TK-TK的KF细胞系后，Ganciclovir（GCV）的培养基的不同浓度为0.5％，1％，1％，1％，3％，5％，5％和10％的细胞均为1％或杀死细胞的效果，并确认了杀死的细胞，并确认了1％或更多的细胞。该实验系统被确定为1％。此外，在未表达HSV-TK的野生KF细胞系上未观察到细胞杀伤作用。 Confirmation of HSV-tk bystander effect in vitro: In culture medium where wild KF cell lines and HSV-tk-expressing KF cell lines were mixed in various ratios, the number of cells after administering GCV at a concentration of 1% and cultured for 2 days tended to decrease as the proportion of HSV-tk-expressing KF cell lines increased, and the decrease rate was much higher than the ratio of HSV-tk-expressing混合培养过程中的KF细胞系。该结果表明存在旁观者效应的可能性，该作用也通过细胞间间隙连接对相邻野生型细胞具有杀伤作用。当前，使用小鼠的研究正在进行体内确认上述体外效应。