卵巣癌細胞株におけるHSV-tkとGCVを用いた遺伝子治療の抗腫瘍効果の検討

HSV-tk 和 GCV 基因治疗在卵巢癌细胞系中的抗肿瘤作用研究

• 批准号: 19791156
• 负责人: 田中 綾一
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791156/
• 关键词: 卵巣癌; 遺伝子治療; チミジンキナーゼ; ガンシクロビル

近年,単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-tk)を用いた遺伝子治療が前立腺癌や脳腫瘍などで試みられ始めたが,この治療法の可能性を卵巣癌に応用した研究を行っている。卵巣癌に対する抗腫瘍効果を確認するために,卵巣癌細胞株であるKF細胞株を使用し以下の順に研究を進めた。HSV-tk geneの卵巣癌細胞株KFへの導入:HSV-tk輸送作用のあるvectorを用いKF細胞株にリポフェクタミン法でHSV-tk geneをtransfectionし,細胞内でHSV-tkを発現させた。In vitroにおけるGCV至適濃度の決定:HSV-tk発現KF細胞株をRPMI1640medium中で培養後,ガンシクロビル(GCV)を0.5%,1%,3%,5%,10%の異なる濃度にて培養液中に投与した結果,細胞を死滅させる効果を認めたのは1%以上の濃度である事が確認でき,この実験系でのGCVの最低殺細胞濃度は1%であると決定した。また,HSV-tkを発現していないwild KF細胞株に対しては殺細胞効果を認めなかった。In vitroにおけるHSV-tkのbystander effectの確認:wild KF細胞株とHSV-tk発現KF細胞株を様々な比率で混合培養した培養液中に,GCVを1%の濃度で投与し2日間培養した後の細胞数はHSV-tk発現KF細胞株の割合が多い程減少する傾向が認められ,減少率は混合培養の際のHSV-tk発現KF細胞株数の比率をはるかに超えた結果が得られた。この結果は細胞間のgap junctionを通じ隣接するwild type細胞にも殺細胞効果をもたらすbystander effectの存在の可能性を示唆させた。現在上記のin vitroの効果をin vivoで確認するためにマウスを用いた研究を進行中である。

In recent years, pure ヘ 単 ル ペ ス ウ イ ル ス チ ミ ジ ン キ ナ ー ゼ (HSV tk) を い た heritage 伝 son treatment が front adenocarcinoma や 脳 swollen sores な ど で try み ら れ beginning め た が, こ の therapy の possibility を eggs 巣 carcinoma に 応 with し た を line っ て い る. Egg 巣 carcinoma に す seaborne る resistance swollen sores unseen fruit を confirm す る た め に, egg 巣 cancer cells で あ る KF cell lines を use し following の を に research into め た. KF - HSV tk gene の eggs 巣 cancer cells へ の import: HSV tk - conveying role の あ る vector を cell lines with い KF に リ ポ フ ェ ク タ ミ ン method で HSV tk - gene を transfection し, intracellular で HSV tk - を 発 now さ せ た. In Vitro に お け る GCV の decided to optimum concentration: HSV tk - 発 KF cell lines を now after で cultivate RPMI1640medium, ガ ン シ ク ロ ビ ル (GCV) を 0.5%, 1%, 3%, 5%, 10% の different な る concentration に て medium, cast and し に た as a result, the cells を die out さ せ る unseen fruit を recognize め た の は A <s:1> concentration of more than 1%である confirmed で で, <s:1> experimental results were determined by the minimum cytotoxic concentration of で <s:1> GCV <e:1> of 1%であると to <s:1> た た. ま た, HSV tk を 発 now し て い な い wild KF cell lines に し seaborne て unseen fruit を は kill cells to recognize め な か っ た. In vitroにおけるHSV-tk <s:1> bystander effect <e:1> confirm :wild KF cell lines と HSV tk - 発 now KF cell lines を others 々 な ratio で mixed culture し た medium, に, GCV を 1% で の concentration and し 2 day training し た の cells after several は HSV tk - 発 now KF cell lines cut and が い ride more reduce す の る tendency が recognize め ら れ, decrement は mixed culture の interstate の HSV tk - 発 KF cell lines now The <s:1> ratio を を る る に に exceeds the えた result が gives られた. The <s:1> <s:1> result を intercellular <s:1> gap junctionを through じ隣 connection する wild-type cells に <s:1> cytokilling effect を たらす たらすbystander effect <e:1> there is a <s:1> possibility を suggesting させた. Now write down the results of <s:1> in vitro をin vivoで confirm するために ウスを ウスを use た た study をin progress である.