Adeno-associated vector mediated expression of sflt-1 by siRNA efficiently inhibits neovascularization in a murine choroidal neovascularization model

腺相关载体介导的 siRNA 表达 sflt-1 可有效抑制小鼠脉络膜新生血管形成模型

• 批准号: 19791296
• 负责人: IGARASHI Tutomu
• 金额: $ 1.31万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791296/
• 关键词: 遺伝子治療; 加齢性黄斑変性症; 網膜; AAV Vector; 血管新生抑制; 脈絡膜; 新生血管; VEGF; AAVベクター

1. 研究開始当初の背景抗VEGF抗体が加齢性黄斑変性症に対し臨床的に非常に有用であることが近年わかり脚光を浴びているが、様々な臨床治験で眼内炎の発症率が年に1%程度あること、また月1回の投与で十分な効果があるか否か不明なことより、継続的発現が可能な遺伝子治療が期待される。AAVには各サブタイプが知られているが、近年type5、8などのタイプが網膜への遺伝子導入効率が高いとの報告がされている。今回、我々はtype5、type8にマーカー遺伝子であるEGFP(enhanced green fluoresein protein)を組み込んだベクターを作製し、マウスの網膜に対し遺伝子導入を行い比較を行った。またVEGFのレセプターであるflt-1の可溶性flt-1を組み込んだAAVベクターを作製し(AAV-slt-1)、脈絡膜新生血管(CNV)モデルに対し脈絡膜新生血管抑制の効果を検討した。今回脈絡膜に対し導入効率のよい8型を使用した。2. 研究の目的脈絡膜新生血管(CNV)モデルに対し脈絡膜新生血管抑制の効果を検討することにより、CNVモデルに対する遺伝子治療の確立を目的とした。3. 研究の方法7週齢C57BL/6Jマウスにレーザー照射を行ったCNVモデルに対しAAV-sflt-1(n=11)またはコントロールとしてAAV-LacZ(n=12)を網膜下に注入した。2週間後蛍光造影剤を心臓より還流し、フラットマウント作製し、新生血管部位の面積を計測し血管新生抑制効果を比較検討した。4.研究成果type5、type8にEGFPを組み込んだベクターをマウス網膜に導入した結果、AAVtype8の方が遺伝子導入効率・発現効率ともに高かった。また、type5、type8ともに炎症系細胞の発現は認められなかった。CNVモデルに対しAAV-sflt-1またはコントロールとしてAAV-LacZを網膜下に注入した。2週間後蛍光造影剤を心臓より還流し、フラットマウント作製し、新生血管部位の面積を計測し血管新生抑制効果を比較検討した。その結果、新生血管の部位はAAC-1acZ注入群が1470±1000μm_3に対し、AAV-sflt-1注入群は555±304μm_3と有為に血管新生抑制効果を認め、平均62.3%の減少を示した。結論として、AAV type8は網膜に高率に遺伝子導入が可能であり、高発現が可能であった。また、AAV-sflt-1は脈絡膜新生血管に対し抑制効果を認めた。AAV type5、8ともに網膜下注入に対し病理学的所見では特に炎症を認めなかった。脈絡膜新生血管を伴う疾患に対し、抗新生血管を狙った遺伝子治療は有用であると考えられた。

1. Background at the time when the study was started: anti-VEGF antibodies were used in the clinical treatment of macular degeneration and were very useful in recent years. The rate of endometriosis is 1% per year, and the effect is 10% effective if administered once a month. It is unclear whether it is possible or not, and the appearance of the disease is possible and the treatment of the disease is expected. AAV サブタイプが知られているが, type 5, 8 in recent yearsどのタイプがomentum への缝子 Import efficiency が高いとのreport がされている. This time, I will use type 5 and type 8 EGFP (enhanced green fluoresein) Protein) を group み込んだベクターを し, マウスのOREM に対し 伝子 Import を行いComparison を行った.またVEGFのレセプターであるflt-1のsoluble flt-1を组み込んだAAVベクターをproducedし( AAV-slt-1), choroidal neovascularization (CNV) inhibitory effect on choroidal neovascularization. This time, the efficiency of introduction of choroidal membrane into type 8 is improved. 2. The purpose of the study is to establish the effects of choroidal neovascularization (CNV) choroidal neovascularization inhibition and CNV choroidal neovascularization treatment. 3. Research method 7 weeks 颢C57BL/6J マウスにレーザーirradiation を行ったCNV モデルに対しAAV-sf lt-1(n=11)またはコントロールとしてAAV-LacZ(n=12)をsubretinal injectionした. After 2 weeks, the angiogenesis-inhibiting effect of angiography was measured and the angiogenesis-inhibiting effect was measured and compared with the measurement of the area of ​​the new blood vessel. 4. Research results of type5, type8 EGFP group み込んだベクターをマウス omentum に introduction した results, AAVtype8 のsquare が缝子 introduction efficiency ・発出账秒到かった. Type 5, type 8 and inflammatory cells are recognized by the inflammatory system. CNVモデルに対しAAV-sflt-1またはコントロールとしてAAV-LacZをsubretinal injectionした. After 2 weeks, the angiogenesis-inhibiting effect of angiography was measured and the angiogenesis-inhibiting effect was measured and compared with the measurement of the area of ​​the new blood vessel. As a result, the AAC-1acZ injection group and the AAV-sflt-1 injection group had an inhibitory effect on angiogenesis of 555±304 μm_3 at the new blood vessel site, and the average reduction rate was 62.3%, respectively. The conclusion is that it is possible that AAV type8 can be introduced into the omentum at a high rate, and that it is possible for high-risk appearance to occur. The inhibitory effect of AAV-sflt-1 on choroidal neovascularization has been confirmed. AAV type 5 and 8 are injected under the omentum and the pathological findings are specific and inflammation is recognized. Choroidal neovascularization is not associated with the disease, and anti-neovascularization is not effective in treating it.

项目成果

AAV ベクター(8型)による脈絡膜新生血管に対する遺伝子治療

使用 AAV 载体（8 型）进行脉络膜新生血管的基因治疗

• 发表时间: 2009
• 作者: 五十嵐勉;三宅弘一;増田郁也;島田隆;高橋浩
• 通讯作者: 高橋浩

AAVベクター(8型)による脈絡膜新生血管に対する遺伝子治療

使用 AAV 载体（8 型）进行脉络膜新生血管的基因治疗

• 发表时间: 2009
• 作者: 五十嵐勉;三宅弘一;増田郁也;島田隆;高橋浩
• 通讯作者: 高橋浩

Apoptotic Cell Death and Regeneration in the Newborn Retina After Irradiation Prior to Bone Marrow Transplantation

骨髓移植前照射后新生儿视网膜的凋亡细胞死亡和再生

• DOI: 10.1080/02713680701389333
• 发表时间: 2007
• 期刊: Current Eye Research
• 影响因子: 2
• 作者: T. Igarashi;K. Miyake;J. Hayakawa;Ken Kawabata;M. Ishizaki;Hiroshi Takahashi;T. Shimada
• 通讯作者: T. Shimada