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Structural and functional implication of Pex19p protein

Pex19p 蛋白的结构和功能意义

基本信息

批准号：
19790033
负责人：
NAKANO Hiroaki
金额：
$ 2.28万
依托单位：
Hyogo University of Health Sciences (2008)Kyoto University (2007)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

ペルオキシソーム膜に局在するタンパク質Pex3pは、ペルオキシソームの生成や膜タンパク質(PMP)の細胞内輸送に不可欠な因子である。Pex3pの細胞質側ドメインは、PMPの細胞内輸送キャリアであるPex19pと相互作用し、PMPをペルオキシソーム膜に誘導する。この相互作用に関連すると考えられるTrp104の変異体を調製し、Pex19pとの相互作用と細胞内でのペルオキシソーム形成能について詳しく評価した。幾つかの物理化学的な測定から、Pex3p細胞質側ドメインとPex19pは、1対1の安定な複合体を形成することが判明した。この情報に基き、表面プラズモン共鳴を利用して両者の解離定数を求めた結果、3.41nMという値が得られた。この結合力は、他の輸送キャリア:レセプター間の場合に匹敵する強さである。次に、Pex3pのW104AとW104Fの二種類の変異体について同様に解離定数を求めると、それぞれ1080nM、66nMという値が得られた。これは、Trp104の芳香環部分がPex19pとの結合に大きく寄与することを示す。さらに、pex3欠損CHO細胞でPex3p変異体を発現させ、ペルオキシソーム生成の有無を調べた。W104Fは野生型の場合と同様にペルオキシソームの回復が観察された。これに対し、W104Aでは回復が認められなかった。すなわち、Pex3pに依存したペルオキシソーム形成能とPex3p-Pex19p間の結合には、密接な関係があると示唆された。さらにPex3pとPex19pの複合体の単結晶が得られ、2.5Å分解能のX線回折強度データが得られ、2.5Å分解能での立体構造決定に成功した。

ペルオキシソーム片bureau in するタンパクquality Pex3pは、ペルオキシソーPMP is an indispensable factor for intracellular transport of PMP. Pex3p's cytoplasmic side function, PMP's intracellular transport and interaction, PMP's intracellular transport and interaction, and PMP's membrane induction. Pex1 9pとのinteraction and intracellular でのペルオキシソーム formation energy について detail しく Comment 価した. Several physical and chemical tests were carried out to determine the structure of the cytoplasmic side of Pex3p, Pex19p, and the formation of the 1対1 stable complex.このInformation にbaseき, surface プラズモン resonates をutilization して両者のdissociation definite number をasks めた results, 3.41nM という値がgets られた.このbonding forceは、his transportationキャリア：レセプターの occasionに rivals する强さである. Second, Pex3p's W104A and W104F are two different types of heterogeneous ones. The dissociation definite number is めると, それぞれ1080nM, 66nM という値がgets られた.これは、Trp104のaromatic ring part がPex19p との Combined with に大きく发 and することをshow す. The Pex3p allogeneic appearance of Pex3p in CHO cells and the generation of Pex3p allotypes in CHO cells have been adjusted. W104F is a wild-type product that can be used in different situations.これに対し、W104AではReply が见められなかった.すなわち, Pex3p dependence, したペルオキシソーム formation ability, とPex3p-Pex19p のcombination, close connection があるとshows 唆された.さらにPex3p and とPex19p の単crystallization が得られ, 2.5Å resolution energy のX-ray refractory strength データが得られ, 2.5Å resolution energy でのstereostructure determination success した.