Structural and functional implication of Pex19p protein

Pex19p 蛋白的结构和功能意义

• 批准号: 19790033
• 负责人: NAKANO Hiroaki
• 金额: $ 2.28万
• 依托单位: Hyogo University of Health Sciences (2008)Kyoto University (2007)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790033/
• 关键词: Pex19p; Pex3p; ペルオキシソーム; 相互作用; Biacore; 沈降平衡法; X線結晶解析; CHO細胞; 蛍光スペクトル; タンパク質

ペルオキシソーム膜に局在するタンパク質Pex3pは、ペルオキシソームの生成や膜タンパク質(PMP)の細胞内輸送に不可欠な因子である。Pex3pの細胞質側ドメインは、PMPの細胞内輸送キャリアであるPex19pと相互作用し、PMPをペルオキシソーム膜に誘導する。この相互作用に関連すると考えられるTrp104の変異体を調製し、Pex19pとの相互作用と細胞内でのペルオキシソーム形成能について詳しく評価した。幾つかの物理化学的な測定から、Pex3p細胞質側ドメインとPex19pは、1対1の安定な複合体を形成することが判明した。この情報に基き、表面プラズモン共鳴を利用して両者の解離定数を求めた結果、3.41nMという値が得られた。この結合力は、他の輸送キャリア:レセプター間の場合に匹敵する強さである。次に、Pex3pのW104AとW104Fの二種類の変異体について同様に解離定数を求めると、それぞれ1080nM、66nMという値が得られた。これは、Trp104の芳香環部分がPex19pとの結合に大きく寄与することを示す。さらに、pex3欠損CHO細胞でPex3p変異体を発現させ、ペルオキシソーム生成の有無を調べた。W104Fは野生型の場合と同様にペルオキシソームの回復が観察された。これに対し、W104Aでは回復が認められなかった。すなわち、Pex3pに依存したペルオキシソーム形成能とPex3p-Pex19p間の結合には、密接な関係があると示唆された。さらにPex3pとPex19pの複合体の単結晶が得られ、2.5Å分解能のX線回折強度データが得られ、2.5Å分解能での立体構造決定に成功した。

ペ ル オ キ シ ソ ー ム membrane に bureau in す る タ ン パ ク qualitative Pex3p は, ペ ル オ キ シ ソ ー ム の や film タ ン パ ク mass (PMP) conveying に not owe な の cell factor で あ る. Pex3p の cytoplasmic side ド メ イ ン は, PMP の cells conveying キ ャ リ ア で あ る Pex19p と し interaction, PMP を ペ ル オ キ シ ソ ー ム induced membrane に す る. こ の interaction に masato even す る と exam え ら れ る Trp104 の - variant を modulation し, Pex19p と の interaction と intracellular で の ペ ル オ キ シ ソ ー ム can form に つ い て detailed し く review 価 し た. A few つ か の な the physical chemistry of the か ら, Pex3p cytoplasmic side ド メ イ ン と Pex19p は, 1 1 の seaborne stable な complex を form す る こ と が.at し た. こ の intelligence に き, surface プ ラ ズ モ ン resonance を using し て struck is の dissociation constant を o め た result, 3.41 nM と い う numerical が must ら れ た. The binding force of <s:1> レセプタ and the other <s:1> transport キャリア:レセプタ and <s:1> situations are に as strong as する and さである. に, Pex3p の W104A と W104F の two kinds の - variant に つ い て with others に dissociation constant を o め る と, そ れ ぞ れ 1080 nm, 66 nm と い う numerical が must ら れ た. The <s:1> れ す, Trp104 <s:1> aromatic ring part がPex19pと <e:1> combined with に large く く and する とを とを show す. さ ら に, pex3 owe damage CHO cells で Pex3p - variant を 発 now さ せ, ペ ル オ キ シ ソ ー ム generated の presence of を adjustable べ た. W104F <s:1> wild type <s:1> situation と is the same as にペ ム キシソ キシソ ム ム が観 reply が観 observe された. Youdaoplaceholder2 れに to and W104Aで で reply が acknowledging められな った. す な わ ち, Pex3p に dependent し た ペ ル オ キ シ ソ ー ム can form と Pex3p - Pex19p の combination between に は, contact な masato is が あ る と in stopping さ れ た. さ ら に Pex3p と Pex19p の complex の 単 crystallization が have ら れ, 2.5 A decomposition can の X-ray inflexion strength デ ー タ が have ら れ, 2.5 A decomposition can で の three-dimensional structure decision に successful し た.

项目成果

ペルオキシソーム膜タンパク質輸送に関与するPex3pとPex19pの相互作用様式

Pex3p和Pex19p参与过氧化物酶体膜蛋白运输的相互作用模式

• 发表时间: 2008
• 作者: 佐藤康彦;柴田洋之;中野博明;松園裕嗣;柏山恭範;小林裕次;藤木幸夫;今中常雄;加藤博章
• 通讯作者: 加藤博章