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乳がん由来株化細胞を用いたレプチン機能の阻害化合物の探索とその作用機序の解明

使用乳腺癌细胞系寻找抑制瘦素功能的化合物并阐明其作用机制

基本信息

批准号：
19890183
负责人：
海野雄加
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題では、ケミカルジェネティクス的手法を駆使し、肥満とがんの繋がりを分子レベルで解析することを目的とする。具体的には、細胞膜透過性かつ低分子量の、レプチン誘導性がん細胞増殖に対する阻害化合物の取得と、その化合物の持つ生物学的特徴の解明を目指す。初年度である平成19年度では、スクリーニング系の構築を行った。MDA-MB-231やMCF7細胞などの6種類の乳がん由来株化細胞を用い、組み換え体レプチンで直接処理した際の細胞増殖の速度変化を検討した。その結果、全細胞株でレプチンによる顕著な増殖促進は観察出来ず、レプチン処理による系では、化合物の取得が非常に困難であると判断した。そこで、レプチンの発現を正に制御する転写因子hypoxia inducible factor-1α(HIF-1α)に着目し、HIF-1α高発現細胞株選択的に細胞増殖を阻害する化合物の取得に切り替え、そのスクリーニング系を構築した。構築した系を用い、既に市販されている化合物(DNA作用薬、一酸化窒素供与剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞骨格・細胞分裂阻害剤など)によるミニライブラリーでスクリーニングの予備検討を行った。その結果、陽性株選択的な阻害化合物は得られず、反対に陰性株でのみ選択的にカスパーゼを活性化する、又は増殖を阻害する化合物が複数得られた。すなわち、HIF-1α高発現株が薬剤耐性を有する可能性が示された。さらに、所有する全化合物ライブラリーを用いたランダムスクリーニングから、陽性株選択的に増殖阻害活性を有する化合物の取得に成功した。今後は、これら化合物の作用機序解明を行う予定である。

This research topic includes the following aspects: 1. the method of production, 2. the molecular analysis and 3. the method of production. Specifically, we focus on the acquisition of harmful compounds that are related to cell membrane permeability, low molecular weight, and lepton-induced cell proliferation, and the understanding of the biological characteristics of these compounds. In the first year of the year, the construction of the system was carried out. To investigate the growth rate of MDA-MB-231 and MCF7 cells in six different cultures derived from cultured cells in vitro, in vitro and in vitro. The results, the whole cell line, the growth promotion, the detection, the treatment, the acquisition of the compound are very difficult. Construction of a new system for obtaining compounds that inhibit cell proliferation by inhibiting the expression of hypoxia inducible factor-1α(HIF-1α) in highly sensitive, HIF-1α-producing cell lines. Construction of a system of chemical compounds (DNA-acting agents, one-acid hormone supply agents, complex inhibitors, cytoskeleton inhibitors, cell division inhibitors) used in the preparation of chemical compounds (DNA-acting agents, one-acid hormone supply agents). The results showed that the inhibition compounds of the positive strains were negative, and the inhibition compounds of the negative strains were negative. This shows the possibility that HIF-1α high-expression strains may be resistant to drugs. In addition, all the compounds were successfully obtained from the positive strains selected for their growth inhibition activities. In the future, the mechanism of action of these compounds will be clarified.