弾性線維維持・再生におけるＤＡＮＣＥの役割の研究

DANCE在弹性纤维维护和再生中的作用研究

• 批准号: 12J40147
• 负责人: 東 淳子
• 金额: $ 1.88万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J40147/
• 关键词: DANCE; 弛性線維; CreERT2; 老化関連疾患; 弾性線維

弾性線維の劣化は肺気腫等の老化関連疾患の原因と考えられているが、その維持機構については不明な点が多い。胎生期の弾性線維形成に必須であるDANCEは、成体期にも高いレベルで発現し加齢に伴い組織のDANCEの活性が低下していることから、成体期における弾性線維の維持に関わっていることが推測されていたが、従来のDANCEノックアウトマウスでは胎児期の弾性線維形成に異常があるために検証は困難であった。そこで申請者はCreERT2システムを利用して弾性線維形成の終了した成体期にDANCEの発現を抑制し、実際に弾性線維の劣化が進むかどうかを検証する計画を立てた。平成25年度は、DANCEの遺伝子座にCreERT2をノックインしたマウス(ノックインマウス)の作成と、DANCE遺伝子の一部をloxPではさんだ(flox)マウスの評価を計画した。ノックインマウスについては、生体でのCreERT2の蛋白の発現効率を上げるために、ほ乳類のコドン使用頻度に応じてCre遺伝子配列を設計(最適化)し、クローニングした。そしてターゲティングベクターをBACの大腸菌内組換え(recombineering)技術を用いて作成し、複数のES細胞を樹立し、良好なキメラマウスを複数得られたが、F1を得られなかったので再度ES株を作成している。DANCE floxマウスはノックインマウスと同様の手段でES株を作成し、キメラマウスからFlマウスを得た。F1マウスはまず全身でCreリコンビナーゼを発現するマウスと交配し、ノックアウトマウスと同様の表現型を呈することを確認した。同時に、フリッペースマウス(生殖系列でFRTを発現するマウス)と交配してNeoカセットが除去されたマウスを得た。今後ノックインマウスを得られたら交配する予定である。

The causes of age-related diseases such as lung swelling and aging related diseases are examined. The DANCE activity in the adult tissue is low, and the DANCE activity in the adult tissue is low. It is speculated that the DANCE activity in the fetal tissue is abnormal. The applicant shall establish a plan for the use of Creert 2 systems to inhibit the occurrence of DANCE at the end of the development period and to detect the deterioration of DANCE at the end of the development period. In 2015, the DANCE family was founded in 1998 and the DANCE family was founded in 1999. The protein expression efficiency of CreERT 2 in vivo is improved, and the protein sequence of CreERT 2 is designed (optimized) according to the frequency of use of CreERT. The E. coli recombination technique of BAC was used to establish multiple ES cells, and F1 was used to establish multiple ES cells. DANCE flox F1 is the same phenotype as the whole body. The FRT is the first to be released. From now on, it's time for you to have sex.

项目成果

Bmp7 maintains undifferentiated kidney progenitor population and determines nephron numbers at birth.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0073554
• 发表时间: 2013
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Tomita M;Asada M;Asada N;Nakamura J;Oguchi A;Higashi AY;Endo S;Robertson E;Kimura T;Kita T;Economides AN;Kreidberg J;Yanagita M
• 通讯作者: Yanagita M

Twisted gastrulation, a BMP antagonist, exacerbates podocyte injury.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0089135
• 发表时间: 2014
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Yamada S;Nakamura J;Asada M;Takase M;Matsusaka T;Iguchi T;Yamada R;Tanaka M;Higashi AY;Okuda T;Asada N;Fukatsu A;Kawachi H;Graf D;Muso E;Kita T;Kimura T;Pastan I;Economides AN;Yanagita M
• 通讯作者: Yanagita M