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遷移金属錯体を活用した標品不要のタンパク質・ペプチド絶対定量基盤の構築

构建无需使用过渡金属配合物进行制备的蛋白质和肽绝对定量平台

基本信息

批准号：
14J06347
负责人：
佐藤涼
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

遷移金属錯体を配したエドマン型試薬による高感度・高選択的タンパク質絶対定量法の構築を目的に、試薬デザインと調製、及びモデルペプチドへの適用と分析を行った。まず、鍵化合物であるメタロセン型エドマン試薬を調製した。即ち、フェロセニルイソチオシアネート (FcITC) 及びフェロセニルエチルイソチオシアネート (FcEtITC) を、対応するアミンからチオ炭酸O,O'-ジ-2-ピリジルとの一段階反応で調製した。次いで、これらとモデルペプチド (アンジオテンシンII) の反応を精査した所、常法 (アルカリ性溶媒、55℃加熱) によるエドマン試薬付加条件で各々98%, 87%の高収率なラベル化を認めた。ちなみに、過剰試薬はn-ヘキシルアミンでクエンチ後、n-ヘキサンを用いた液-液抽出で除去した。試薬付加アンジオテンシンIIの分析を液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析 (LC/MS/MS) で行うため、エレクトロスプレーイオン化を試料分離・検出感度の観点から精査した。その結果、分離カラムに汎用型ODSカラム、移動相にペプチドの分離・イオン化に好適なギ酸/水/アセトニトリル系溶媒を用いる時、高感度な検出が可能であった。また、LC/MS/MSにより、ラベル化部位は、ペプチドN末端アミノ基である事が判明した。この時、試薬付加アンジオテンシンIIからは、ペプチド同定の際に有用なb及びyイオン系列のフラグメントが主に得られた。以上、メタロセン型エドマン試薬によるペプチドのラベル化・分析時のフラグメント特性が明らかとなり、本法をタンパク質絶対定量に適用するための基礎的検討がなされた。

Move the wrong body of metal to match the high sensitivity, high sensitivity and high sensitivity. Compounds, and compounds. That is to say, please tell me that there is a negative relationship between FcITC and FcEtITC, and that there is a reversal in the following paragraph. In the second half of the year, the rate of increase is 98%, and the rate is 87%. In the second part, the standard method (solvent, 55 ℃, 55 ℃) is used in order to increase the rate of payment. 98%, 87%, 98% and 87%, respectively. After a short period of time, please use the liquid-liquid extraction method to remove the spoilage. In the II analysis of liquids, the sensitivity of the material is separated from the sensitivity of the liquid, the sensitivity of the material is separated, and the sensitivity is measured by the quantitative analysis of the liquid (LC/MS/MS). The results of the test, the separation system, the ODS filter, the mobile phase, the temperature, the temperature, the temperature You need to know what's going on. You need to know what's going on at the end of the day. You need to know what's going on. LC/MS/MS. At the same time, you should pay more and more to ensure that the II is available, that is, if you want to make sure that it is useful, and that you can get the information from the owner. The characteristics of the above are sensitive to the chemical analysis, and this method is applicable to the quantitative analysis of the chemical basis.