肝内胆汁うっ滞症の創薬分子標的に資するユビキチンリガーゼの同定

鉴定有助于肝内胆汁淤积药物发现分子靶标的泛素连接酶

• 批准号: 14J12388
• 负责人: 相田 健佑
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J12388/
• 关键词: トランスポーター

Multidrug resistance-associated protein 2 (MRP2)は、Bile salt export pump (BSEP)と同様に、肝細胞において主に毛細胆管側膜(canalicular membrane: CM)上に発現し、細胞内から胆汁中への胆汁酸、有機アニオンの排泄を担うABCトランスポーター(TP)であり、その機能低下は肝内胆汁うっ滞を惹起する。MRP2発現293細胞の粗膜分画からMRP2抗体を用いて調製した免疫沈降物中において、MRP2のUb化が確認された。MRP2 293細胞の細胞膜タンパク質を細胞膜非透過性のEZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotinを用いて標識し(biotin標識)、細胞膜上MRP2の分解速度を測定したところ、C末端のグリシン残基を欠失したUbのドミナントネガティブ体(UbΔGG)を発現させることにより顕著な低下が認められた。また、MRP2の内在化速度に関しては、UbΔGGの発現による有意な変化は認められなかったものの、内在化したMRP2の分解速度を測定したところ、UbΔGGの強制発現によって、内在化したMRP2の分解速度は顕著に低下した。以上の結果からMRP2のUb化はMRP2の内在化後の分解シグナルとして働くことが示唆された。

Multidrug resistance-associated protein 2 (MRP2), Bile salt export pump (BSEP), and the like, are found in liver cells, bile acids in bile, and excretion of organic compounds in bile. MRP2 was identified in the crude membrane of 293 cells by the use of MRP2 antibody in the preparation of immuno-sediments. EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin was used to identify the cell membrane impermeability of MRP2 293 cells, and the decomposition rate of MRP2 on the cell membrane was measured. The C-terminal residue was missing, and Ub Δ GG was detected. The rate of internalization of MRP2 is lower than that of Ub Δ GG. The rate of decomposition of MRP2 is lower than that of Ub Δ GG. The above results show that the decomposition of MRP 2 after Ub transformation and MRP 2 internalization