胎盤特異的な遺伝子操作による妊娠高血圧症モデルの作製と病因遺伝子の機能解析

胎盘特异性基因操作建立妊娠期高血压模型及致病基因功能分析

• 批准号: 15J03876
• 负责人: 武藤 真長
• 金额: $ 1.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03876/
• 关键词: 妊娠高血圧症候群; 疾患モデルマウス; 子宮内発育不全; 胎盤; ゲノム編集

本研究ではCRISPR/Cas9システムを用いて、妊娠高血圧症患者（PE : Preeclampsia）で変異が知られている遺伝子（PE関連遺伝子）のノックアウト（KO）マウスを作製して表現型解析を行い、ヒト産科疾患モデルの作製を行った。PESNPdb (Pre-eclampsia SNP database)から妊娠高血圧症患者の胎盤で変異がある遺伝子（4種類）を選定し、切断したい標的塩基配列を含むguide RNAを発現するpX330プラスミドをマウス受精卵へ注入し、遺伝子改変マウスを作製した。ヘテロ欠損マウス同士の交配実験では、産仔数及びKOマウスの出生率は正常であったが、ホモ欠損マウス同士を交配させると野生型に比して産仔数が約半数になることがわかった。また各遺伝子型のマウスを交配させて胎仔重量を測定したところ、雌のホモ欠損マウスの交配でのみ、胎仔発育が低下することが確認できた。このPE関連遺伝子は、胎盤の免疫組織染色により母体由来の脱落膜細胞に発現が確認できたことから、胎仔側だけでなく母体側の遺伝子欠損が病態を引き起こす可能性が示唆された。さらに、CRISPR/Cas9システムではguide RNAと一本鎖オリゴDNAを同時にマウス受精卵へ注入し、点変異を導入できることから、ヒト胎盤で妊娠高血圧症の病態を呈することが示唆されているミスセンス変異マウスを作製した。今後は、点変異と病態との関係性を生体レベルで解析する予定である。

This study で は CRISPR/Cas9 シ ス テ ム を with い て, pregnancy patients with high blood 圧 disease (PE: Preeclampsia) で - different が know ら れ て い る heritage 伝 child (PE masato even heritage 伝) の ノ ッ ク ア ウ ト (KO) マ ウ ス を cropping し て phenotype parsing を い, ヒ ト obstetrical diseases モ デ ル の cropping を line っ た. PESNPdb (Pre-eclampsia SNP database) ら ら がある remains 伝 of で changes in the placenta of patients with hyperhypertension during pregnancy (4 types) を selection of <s:1>, cutting of <s:1> た base arrangement of た target を contains むguide RNA を 発 now す る pX330 プ ラ ス ミ ド を マ ウ ス fertilized egg へ injection し, heritage 伝 child change - マ ウ ス を cropping し た. ヘ テ ロ owe loss マ ウ ス with James の mating be 験 で, litter size and び は KO マ ウ ス の は normal birth rate で あ っ た が, ホ モ owe loss マ ウ ス mating with "を さ せ る と wild-type に than し て が litter about half に な る こ と が わ か っ た. ま た each legacy 伝 sub-type の マ ウ ス を mating さ せ て tire determination of seed weight を し た と こ ろ, female の ホ モ owe loss マ ウ ス の mating で の み, tire seed 発 yukon が low す る こ と が confirm で き た. こ の PE masato even heritage 伝 は, placenta の immunohistochemical staining に よ り maternal origin の peeling membrane cells に 発 が now confirmed で き た こ と か ら, tire side だ け で な く maternal side の heritage 伝 son owe loss が pathological を lead き up こ が す possibility in stopping さ れ た. さ ら に, CRISPR/Cas9 シ ス テ ム で は guide RNA と a lock オ リ ゴ DNA を simultaneously に マ ウ ス fertilized egg へ injection し, point - different を import で き る こ と か ら, ヒ ト placenta で pregnancy high blood の 圧 disease pathological を was す る こ と が in stopping さ れ て い る ミ ス セ ン ス - different マ ウ ス を cropping し た. In the future, する, point variation と pathological と <s:1> related を organisms レベ で で analysis する is determined である.

项目成果

レンチウイルスベクターを用いたマウス胎盤形成におけるPlac1の機能解析

使用慢病毒载体分析 Plac1 在小鼠胎盘形成中的功能

• 发表时间: 2015
• 作者: Yoneshige A;Muto M;Watanabe T;Hojo H;Matsuda J.;Masanaga Muto;Masanaga Muto;武藤真長
• 通讯作者: 武藤真長

Functional analysis of Plac1 in placental formation using knockout mice and lentiviral vector-mediated complementation

使用基因敲除小鼠和慢病毒载体介导的互补作用分析 Plac1 在胎盘形成中的功能

• 发表时间: 2016
• 作者: Yoneshige A;Muto M;Watanabe T;Hojo H;Matsuda J.;Masanaga Muto
• 通讯作者: Masanaga Muto

Analysis of PLAC1 in mouse placental formation by a lentiviral vector

通过慢病毒载体分析 PLAC1 在小鼠胎盘形成中的作用

• 发表时间: 2015
• 作者: Yoneshige A;Muto M;Watanabe T;Hojo H;Matsuda J.;Masanaga Muto;Masanaga Muto
• 通讯作者: Masanaga Muto

Elf5-centered transcription factor hub controls trophoblast stem cell self-renewal and differentiation through stoichiometry-sensitive shifts in target gene networks.

• DOI: 10.1101/gad.268821.115
• 发表时间: 2015-12-01
• 期刊: Genes & development
• 影响因子: 10.5
• 作者: Latos PA;Sienerth AR;Murray A;Senner CE;Muto M;Ikawa M;Oxley D;Burge S;Cox BJ;Hemberger M
• 通讯作者: Hemberger M

The effects of chemically synthesized saposin C onglucosylceramide-β-glucosidase.

化学合成的皂苷 C 对葡萄糖神经酰胺-β-葡萄糖苷酶的影响。

• DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2015.06.004
• 发表时间: 2015
• 期刊: Clinical Biochemistry
• 影响因子: 2.8
• 作者: Yoneshige A;Muto M;Watanabe T;Hojo H;Matsuda J.
• 通讯作者: Matsuda J.