細胞内侵入抗体を用いた重症心不全に対する革新的治療薬の開発

利用细胞内侵袭抗体开发治疗严重心力衰竭的创新药物

• 批准号: 15J05059
• 负责人: 土田 翔太
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J05059/
• 关键词: 核酸デリバリー; 心不全

本研究ではHB-EGF抗体用いた不全心特異的にsiRNAを送達可能なベクターの開発を行っており、本年度は下記の研究を行った。①HB-EGF抗体結合ベクターの標的細胞の同定蛍光標識HB-EGF抗体結合ベクターを不全心モデルマウスに投与し、標的細胞の同定を行った。その結果、HB-EGF抗体結合ベクターは線維芽細胞およびマクロファージを標的とすることが示唆された。しかし、マクロファージではFcレセプターを介した非特異的な結合が起きている可能性が示唆された。そこで、Fcブロックを用いてFcレセプターとの結合を阻害した実験を行った。その結果、線維芽細胞での蛍光強度に変化は見られなかったが、マクロファージで蛍光強度の低下がみられた。また、HB-EGF抗体結合ベクターはIsotype control抗体で作成したベクターに比べてマクロファージで蛍光を示すことから、マクロファージでは一部Fcレセプターと結合していることが明らかになった。②flow cytometryを用いた細胞分離法これまでHB-EGFは心筋細胞で発現していることが報告されてきた。しかし、本研究ではHB-EGF抗体結合ベクターが線維芽細胞及びマクロファージに結合することから、これらの細胞でのHB-EGFの発現を確認するため、HB-EGF抗体での免疫染色を行った。しかし、所有しているHB-EGF抗体の免疫染色では再現性のある結果は得られなかった。そこで、心筋組織中の細胞を分離して各細胞でのHB-EGF mRNA発現量の比較検討を行うため、flow cytometryでの非心筋細胞の単離法の確立を行った。マーカーとなる遺伝子の発現量を比較した所、flow cytometryで血管内皮細胞と線維芽細胞の分離可能であることが明らかになった。しかし、マクロファージでは高い純度が得られなかったため、マーカーの選別が必要である。flow cytometryで単離した内皮細胞、線維芽細胞及び心筋細胞のHB-EGF mRNAの発現量を比較した所、線維芽細胞でHB-EGFの高発現している事が明らかになった。

In this study, HB-EGF antibodies were delivered with a special siRNA. It is possible that we will start a clinical trial this year, and we will conduct a further study this year. 1HB-EGF antibodies were identified by immunocytochemistry and immunocytochemistry. HB-EGF antibodies were identified by immunopotentiation and immunoassay. The results of the experiment and the combination of HB-EGF antibody and cell line maintenance assay showed that there was no significant difference between the two groups. Please tell me that the combination of non-specific information indicates that there is a possibility that you will not be able to Fc. Please use the combination of Fc and Fc devices to prevent the damage. The result of the experiment, the linear maintenance of the germ cell, the intensity of light, the intensity of light, the intensity of light and the intensity of light. The combination of anti-HB-EGF antibody and anti-Isotype control antibody was used to make a clear picture of the disease. The combination of Fc antibody and anti-DNA antibody was used to show that there was a clear picture of the disease. 2flow cytometry uses the method of cell division to determine the number of cells in the heart of HB-EGF. In this study, HB-EGF antibodies were used in combination with cell lines to maintain germ cells and cell lines were used to detect HB-EGF antibodies. In this study, HB-EGF antibodies were detected by immunostaining. The results of immunostaining for all HB-EGF antibodies were positive, and the results showed that the results were negative. In the tissue of heart and heart, the amount of HB-EGF mRNA in each cell is higher than that in the cell of the heart, and that of the cell in the heart tissue is higher than that of the cell in the heart tissue. The number of cells in the heart tissue is higher than that in the heart tissue, and the number of cells in the heart tissue is higher than that in the heart tissue. It is possible that the separation of vascular endothelial cell lines and germ cells in flow cytometry may be more sensitive than that in other places. Please make sure that the temperature is very high, and that the necessary information is required. The amount of flow cytometry isolated from endothelial cells, line-maintained germ cells and heart-related cells was higher than that of HB-EGF cells.

项目成果

HB-EGF抗体を用いた不全心特異的核酸デリバリーシステムの開発

使用 HB-EGF 抗体开发衰竭心脏特异性核酸递送系统

• 发表时间: 2015
• 作者: Osako;Chikako;須藤遙子;須藤遙子;須藤遙子;須藤遙子;須藤遙子（共編著）;土田翔太
• 通讯作者: 土田翔太