ＰＰＭ１ホスファターゼＩＬＫＡＰによる癌抑制機構の解明

阐明PPM1磷酸酶ILKAP的癌症抑制机制

• 批准号: 16J01344
• 负责人: 塚原 七星
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J01344/
• 关键词: ILKAP; PPM1ファミリー; Ser/Thrホスファターゼ; Mdst法

細胞の足場非依存的増殖能の獲得や、アポトーシス耐性は細胞癌化に強く関わっており、その分子機構の解明は効果的な癌治療に必須である。ILKAPはマンガンイオン依存的に酵素活性を持つSer/Thrホスファターゼであり、癌抑制タンパク質としての機能が示唆されている。ILKAPはN端側に特有のrepeat配列を有している。しかしながら、ILKAPの標的基質およびrepeat配列の機能は明らかになっておらず、その制御機構は不明である。本研究では、「PPM1ホスファターゼILKAPの細胞癌化抑制機構の解明」を目的とする。本年度は、基質の同定法の開発およびILKAPのrepeat配列の解析を進めた。昨年度までに、モデルホスファターゼとしてPPM1Aを選択した基質同定法の開発を進めている。細胞内基質に対する基質同定法の基質捕捉を評価するため、HEK293細胞懸濁液に対して捕捉を行い、銀染色によって捕捉されたタンパク質を解析した。捕捉条件下である特異的二価イオン存在下において捕捉を実施したところ、特異的二価イオン存在下で捕捉を行った時だけ観察されるバンドが見出され、基質同定法による基質の捕捉が示唆された。ILKAPのRepeat配列をペプチドとして合成し、ILKAPの脱リン酸化活性におよぼす影響を解析した。Repeat配列は繰り返し配列が1回だけのsingle repeatペプチド、繰り返し配列が2回含まれるrepeatペプチドの2種類を化学合成した。single repeatペプチドに関して、酵素と混合した際および基質と混合した際に別々の異なる反応が見られた。酵素と混合した際はILKAPの脱リン酸化活性に全く影響を与えなかったが、基質と混合した際にはILKAP脱リン酸化活性を上昇させ、Single repeatペプチドがある一定の濃度に達するまでは上昇、それ以降の濃度では効果が下がるという結果となった。基質と混合した際に効果が現れたことから、ILKAP repeat 配列は基質との結合能に関与している可能性が示唆された。

The acquisition of field-independent proliferation of cells, resistance to cell cancer, and the understanding of molecular mechanisms are essential for cancer treatment. The enzyme activity that ILKAP is dependent on is Ser/Thr.スファターゼであり, cancer suppressor タンパク性としてのFUNCTION がshows instigation されている. ILKAP has a unique repeat arrangement at both ends.しかしながら, ILKAP's standard matrix およびrepeat arrangement の function は 明らかになっておらず, その control mechanism は である. The purpose of this study is "Explanation of the cell cancer inhibition mechanism of PPM1 cell cancer". This year's は, matrix のdetermination method の発およびILKAP のrepeat arrangement のanalytic を advance めた. Last year's までに、モデルホスファターゼとしてPPM1Aを选択したbase same as the fixed method の开発を入めている. Evaluation of matrix capture method using intracellular matrix homogeneous method, HEK293 cells Suspension liquid is collected and analyzed, and silver dyeing is collected and analyzed. Under the capture conditions, there is a special two-価イオン and a special two-価イオン is present. The next capture method is the same as the capture method. ILKAP's Repeat Coordination System is Synthetic, and ILKAP's Acidification Activity is Influenced and Analyzed. Repeat the arrangement は缲り return the arrangement が1 return だけのsingle repeat ペプチド, 粲り return the arrangement が2 return containing the まれるrepeat ペプチドの2 types をchemical synthesis した. single repeatペプチに Offして, enzymeとmixedしたinteriorおよびbaseとmixedしたinteriorに不々のisoなるcounter応が见られた. Enzyme and mixed acidification activity of ILKAP, dehydration and acidification activity, full influence and dehydration, matrix and mixed acidification activity of ILKAP, dehydration and acidification activity, increase, Single Repeatペプチドがあるa certain concentration of に达するまでは rises, and the それthen decreases the concentration of the では effect が下がるという results となった. The matrix is ​​mixed, the effect is present, the ILKAP repeat arrangement is the matrix, the binding energy is connected, and the possibility is demonstrated.