新規ＧａｌＮＡｃ特異的グリコシダーゼの立体構造に基づくオリゴ糖の合成と機能性開拓

基于新型GalNAc特异性糖苷酶三维结构的寡糖的合成和功能开发

• 批准号: 16J03683
• 负责人: 佐藤 真与
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03683/
• 关键词: 糖質関連酵素; ビフィズス菌; X戦結晶構造解析; 腸内細菌; 構造生物学; 酵素学

ビフィズス菌はヒトに有用な腸内細菌であり、難消化性糖質を利用するための様々な独自の機構や酵素を保持することが明らかとなってきた。本研究では、ビフィズス菌が利用するヒト由来の糖鎖に含まれる、N-アセチル基を有するN-アセチルガラクトサミンやN-アセ チルグルコサミンの代謝に関わるビフィズス菌由来の酵素に着目し、それらのX線結晶構造解析を行い、その分子機構を明らかにして いくことを目的としている。本年度はBifidobacterium bifidum由来α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ(NagBb)、同種由来β-N-アセチルガラクトサミニダーゼ(SiaBb3)、そしてBifidobacterium longum由来UDP-グルコースヘキソース1-リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ(GalT)に関して研究を行なった。NagBbに関しては、研究データをまとめ、J. Biol. Chem.誌にて論文を発表した。また、活性中心部位に存在するユニークな金属イオンの同定を試みるため、金属定量も行なった。SiaBb3に関しては、発現系、精製方法を確立した。結晶化スクリーニングまで行ったが、強い反射を得られる条件決定までには至らず、今後も引き続き模索していく必要がある。GalTに関しては、結晶最適化を行い多数のデータを得、現在解析中である。活性中心部位と基質の電子密度マップが見られないため、結晶化条件のさらなる改善・再検討が必要である。

The bacteria and digestive sugar were used to keep the enzyme enzyme in the machine to keep it clear. The purpose of this study is to establish an analytical method for the determination of enzymes and X-ray crystallography in this study. in this study, we used the method of enzyme targeting, X-ray crystal analysis, and X-ray crystal analysis. The molecular organs of the Communist Party of China have made it clear that the purpose of the war is to meet the needs of the public. This year's Bifidobacterium bifidum is based on the alpha-N-trimester (NagBb), the same origin of β-N-terpene (SiaBb3) and the same origin of the Bifidobacterium longum (UDP-). This year, it has a significant impact on the performance of GalT. NagBb, research, J. Biol. Chem. Log

项目成果

α-N-アセチルガラクトサミニダーゼの金属結合サイトと阻害剤を用いた解析

使用金属结合位点和抑制剂分析 α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶

• 发表时间: 2017
• 作者: 佐藤真与;Dorothee Liebschner;山田悠介;松垣直宏;千田俊哉;荒川孝俊;芦田久;伏信進矢
• 通讯作者: 伏信進矢

ビフィズス菌由来N-アセチルヘキソサミン 1-キナーゼの立体構造とオリゴ糖合成に向けた改変

双歧杆菌N-乙酰己糖胺1-激酶的三维结构及其寡糖合成修饰

• 发表时间: 2017
• 作者: 佐藤真与;荒川孝俊;西本完;北岡本光;伏信進矢
• 通讯作者: 伏信進矢

西オーストラリア大学(オーストラリア)

西澳大利亚大学（澳大利亚）

The First Crystal Structure of a Family 129 Glycoside Hydrolase from a Probiotic Bacterium Reveals Critical Residues and Metal Co-factors

来自益生菌的 129 家族糖苷水解酶的第一个晶体结构揭示了关键残留物和金属辅因子

• DOI: 10.1074/jbc.m117.777391
• 发表时间: 2017
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Mayo Sato;Dorothee Liebschner;Yusuke Yamada;Naohiro Matsugaki;Takatoshi Arakawa;Siobhan S. Wills;Mitchell Hattie;Keith A. Stubbs;Tasuku Ito;Toshiya Senda;Hisashi Ashida and Shinya Fushinobu
• 通讯作者: Hisashi Ashida and Shinya Fushinobu

Crystal structure of glycoside hydrolase family 129 α-N-acetylgalactosaminidase from Bifidobacterium bifidum

双歧杆菌糖苷水解酶家族 129 α-N-乙酰半乳糖胺酶的晶体结构

• 发表时间: 2017
• 作者: Mayo Sato;Dorothee Liebschner;Yusuke Yamada;Naohiro Matsugaki;Takatoshi Arakawa;Toshiya Senda;Hisashi Ashida;and Shinya Fushinobu
• 通讯作者: and Shinya Fushinobu