ウイルス性肝炎関連肝発癌における遺伝子変異と遺伝子発現制御機構の解析

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本研究は、ウイルス性肝炎(B型肝炎ウイルス(HBV)やC型肝炎ウイルス(HCV))を背景とした肝細胞癌(HCC)症例におけるHCC遺伝子変異、特にTERT遺伝子変異に注目し、(1)TERT遺伝子発現を調節するプロモーター領域の変異によるTERT遺伝子活性化への影響の解析、プロモーター転写活性制御に寄与する(2)HBV蛋白及び(3)HCV蛋白の探索を行うこと、(4)さらに、転写活性を制御するウイルス蛋白とプロモーター配列結合因子との相互作用の解析も行うことによって、ウイルス性肝炎症例からの発癌や癌進展の特異性を明らかとし、癌悪性度を診断する因子を同定し、肝癌予後決定因子として臨床応用するための学術基盤を形成することを目的とし、下記のことを行った。肝癌手術症例検体から次世代シークエンサーを用いて、肝癌病変部および非癌部の遺伝子を網羅的に解析した。その結果、HBV感染者はTERTプロモーター領域変異と相互排他的にHBVゲノムの組み込みがTERTプロモーター領域近傍にみられること、HBV既往感染HCC患者では、HBVゲノムの組み込みは稀であることが示された。また、既報に示される変異の他にも、様々な変異を認めたため、これらの変異の癌細胞形質における意義について解析中である。次に、TERTプロモーター領域およびTERTプロモーター領域の変異配列を組み込んだレポータープラスミドの作成とレポーターアッセイを行い、変異配列を有する場合にはTERTプロモーター活性が上昇することが示された。HBx蛋白質発現プラスミドの作成とTERTプロモーターレポータープラスミドへの影響をレポーターアッセイを行い、HBx蛋白存在下でTERTプロモーター活性が亢進することが示され、これらの結果よりTERTプロモーターとHBx蛋白の双方がHCC病態に重要な機能を示すことが示唆された。