C型肝炎ウイルス発現モデル動物を用いたsiRNAによる感染抑制系の開発

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本研究において申請者らはC型肝炎ウイルス(HCV)感染に対するRNAi治療の有効性・安全性を検証するため、HCV遺伝子導入マウス、およびHCV感染ヒト肝細胞生者マウスへのshort hairpin RNA(shRNA)発現ベクター導入による、肝組織でのウイルス発現・増殖抑制効果を解析し、以下の結果を得た。(1)HCVゲノムの異なるgenotype間での増殖抑制効果の検討:異なるgenotypeのHCV(1b,2a)に対するRNAiの効果を確認するため、genotype 2aレプリコンより新たにキメラレポーター(Feo)発現レプリコンを作成し、その効果をgenotype 1b Feoレプリコンと比較・検証を行った。レプリコン発現細胞に、HCV-shRNAを導入したところ、1b,2a同等の効果をもってHCV発現を抑制することを確認した。(2)HCV遺伝子発現トランスジェニックマウスモデルにおける解析:マウスアルブミンプロモーター下に肝特異的にHCV-5' UTR/β-galの融合遺伝子を発現するHCV5' UTR/β-galマウスを用いて、HCV shRNAおよびコントロールshRNA発現アデノウイルスベクターを眼窩静脈より投与し、肝細胞でのX-gal染色性を比較したところ、HCV-shRNA導入マウスにおいて肝組織X-Gal染色性が低下する所見を得た。Cre/lox-P制御性HCV遺伝子発現マウスにAxCANCreとsiRNA発現アデノウイルスを共感染させマウス肝臓内のHCV構造蛋白発現を定量したところ、HCV-siRNAせ導入することにより肝組織内core蛋白発現が約80%低下した。今後この結果をもとに、RNAiを応用した、新たな抗HCV治療の実用性と問題点を明確にし、その有効性・実用性について検証を進める。