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C型肝炎ウイルス発現モデル動物を用いたsiRNAによる感染抑制系の開発

使用表达丙型肝炎病毒的模型动物开发使用 siRNA 的感染抑制系统

基本信息

批准号：
18590721
负责人：
大岡真也
金额：
$ 2.57万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18590721/
关键词：
siRNA 遺伝子導入療法 HCVレプリコン

项目摘要

本研究において申請者らはC型肝炎ウイルス(HCV)感染に対するRNAi治療の有効性・安全性を検証するため、HCV遺伝子導入マウス、およびHCV感染ヒト肝細胞生者マウスへのshort hairpin RNA(shRNA)発現ベクター導入による、肝組織でのウイルス発現・増殖抑制効果を解析し、以下の結果を得た。(1)HCVゲノムの異なるgenotype間での増殖抑制効果の検討:異なるgenotypeのHCV(1b,2a)に対するRNAiの効果を確認するため、genotype 2aレプリコンより新たにキメラレポーター(Feo)発現レプリコンを作成し、その効果をgenotype 1b Feoレプリコンと比較・検証を行った。レプリコン発現細胞に、HCV-shRNAを導入したところ、1b,2a同等の効果をもってHCV発現を抑制することを確認した。(2)HCV遺伝子発現トランスジェニックマウスモデルにおける解析:マウスアルブミンプロモーター下に肝特異的にHCV-5' UTR/β-galの融合遺伝子を発現するHCV5' UTR/β-galマウスを用いて、HCV shRNAおよびコントロールshRNA発現アデノウイルスベクターを眼窩静脈より投与し、肝細胞でのX-gal染色性を比較したところ、HCV-shRNA導入マウスにおいて肝組織X-Gal染色性が低下する所見を得た。Cre/lox-P制御性HCV遺伝子発現マウスにAxCANCreとsiRNA発現アデノウイルスを共感染させマウス肝臓内のHCV構造蛋白発現を定量したところ、HCV-siRNAせ導入することにより肝組織内core蛋白発現が約80%低下した。今後この結果をもとに、RNAiを応用した、新たな抗HCV治療の実用性と問題点を明確にし、その有効性・実用性について検証を進める。

In this study, the applicant demonstrated the effectiveness and safety of RNAi therapy against hepatitis C virus (HCV) infection, HCV gene introduction, short hairpin RNA(shRNA) expression in HCV infected hepatocytes, and the effects of HCV gene expression and proliferation inhibition in liver tissue. (1) Study on the effect of HCV replication inhibition between different genotypes: confirm the effect of RNAi on different genotypes of HCV(1b,2a), genotype 2a, genotype 1b, genotype 2a, genotype 2a, genotype 2b, genotype 2a, genotype 2a, genotype 2b, genotype 2b, genotype 2b, The results of HCV-shRNA introduction into the cells and HCV-shRNA inhibition were confirmed. (2) Analysis of HCV gene expression: HCV-5'UTR/β-gal fusion gene expression in liver-specific HCV shRNA gene expression in human eyes, HCV shRNA gene expression in HCV shRNA gene expression, HCV shRNA expression, HCV Cre/lox-P regulatory HCV gene expression was reduced by approximately 80% in response to co-infection and HCV constitutive protein expression in liver tissue. In the future, the results of this study will be discussed, RNAi will be used, and new anti-HCV therapy will be implemented.