肝細胞における遊離コレステロールの毒性発現機構

游离胆固醇对肝细胞的毒性机制

• 批准号: 17K08295
• 负责人: 牧野 麻美
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K08295/
• 关键词: コレステロール; 脂肪滴; 肝細胞; 中性脂質

私たちは培養肝細胞Huh7を用い、アシルコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ACAT）阻害剤、(1s,2s)-2-[3-(2,2-dimethylpropyl)-3-nonylureido]aminocyclohexane-1-yl 3-[N-(2,2,5,5-tetramethyl-1,3-dioxane-4-carbonyl)amino]propionate (F1394)を加えることにより細胞内の遊離コレステロールを上昇させると、低分子量Gタンパク質、Rab18活性に依存して脂肪滴と小胞体の融合が起こることを見出した（Makino et al. Mol Biol Cell 27, 3293(2016)）。遊離コレステロールの導入に利用されるメチル-b;-シクロデキストリンとコレステロールとの複合体（Mb;CD/Chol）をF1394と併用すると細胞死が観察される。この実験系を用い、siRNAライブラリーを用いて不活性化すると細胞死を起こさないタンパク質の検索を行い、Golgi associated, gamma adaptin earcontaining, ARF binding protein 2 (GGA2)、sphingosine-1-phosphate phosphatase 1 (SGPP1)、Rab18、ADP ribosylation factor 1 (ARF1)、inositol polyphosphate-5-phosphatase K (INPP5K)の５つのタンパク質を同定した。本研究では脂肪滴のサイズを正確に測定することが求められる。これまで私たちは精製した脂肪滴のサイズ測定には光散乱を用いていたが、光散乱は粒子サイズが不均一の場合誤差が大きいため、個々の脂肪滴のサイズを測定できるナノ粒子マルチアナライザーを導入した。

In vitro culture of hepatocytes Huh7, the protective agent (ACAT),(1s,2s)-2-[3-], was used.(2,2-dimethylpropyl)-3-nonylureido]aminocyclohexane-1-yl 3-[N-(2,2,5,5-tetramethyl-1,3-dioxane-4-carbonyl)amino]propionate (F1394) is added to the cell, and the free radical in the cell is increased. Rab18 activity is dependent on the initiation of fusion of lipid droplets (Makino et al. Mol Biol Cell 27, 3293(2016)). The introduction and utilization of free radicals into the cell cycle are investigated by using the F1394 complex. The five essential elements of this system, Golgi associated, gamma adaptin earcontaining, ARF binding protein 2 (GGA2), sphingosine-1-phosphate phosphatase 1 (SGPP1), Rab18, ADP ribosylation factor 1 (ARF1), and inositol polyphosphate-5-phosphate K (INPP5K), were identified. This study was conducted to determine whether fat was present or not. The measurement of fat droplets is carried out in the presence of light scattering particles. The measurement of fat droplets is carried out in the presence of light scattering particles

项目成果

Phospholipase C beta 1 induces membrane tubulation and is involved in caveolae formation

磷脂酶 C beta 1 诱导膜管化并参与小窝形成

• 发表时间: 2016
• 作者: Inaba T;Kishimoto T;Murate M;Tajima T;Sakai S;Abe M;Makino A;Tomishige N;Ishitsuka R;Ikeda Y;Takeoka S;Kobayashi T
• 通讯作者: Kobayashi T

Phospholipase Cb1 induces membrane tubulation and is involved in caveolae formation

磷脂酶 Cb1 诱导膜管化并参与小窝形成

• 发表时间: 2017
• 作者: Takehiko Inaba;Takuma Kishimoto;Motohide Murate;Takuya Tajima;Shota Sakai;Mitsuhiro Abe;Asami Makino;Nario Tomishige;Reiko Ishitsuka;Yasuo Ikeda;Shinji Takeoka;and Toshihide Kobayashi
• 通讯作者: and Toshihide Kobayashi

A novel sphingomyelin/cholesterol domain-specific probe reveals the dynamics of the membrane domains during virus release and in Niemann- Pick type C

• DOI: 10.1096/fj.201500075r
• 发表时间: 2017-04-01
• 期刊: FASEB JOURNAL
• 影响因子: 4.8
• 作者: Makino, Asami;Abe, Mitsuhiro;Kobayashi, Toshihide
• 通讯作者: Kobayashi, Toshihide

Acute accumulation of free cholesterol induces the degradation of perilipin 2 and Rab18-dependent fusion of ER and lipid droplets in cultured human hepatocytes.

• DOI: 10.1091/mbc.e15-10-0730
• 发表时间: 2016-11-01
• 期刊: Molecular biology of the cell
• 影响因子: 3.3
• 作者: Makino A;Hullin-Matsuda F;Murate M;Abe M;Tomishige N;Fukuda M;Yamashita S;Fujimoto T;Vidal H;Lagarde M;Delton I;Kobayashi T
• 通讯作者: Kobayashi T