日本人のRhD陰性の遺伝子型の探索：母体血からの胎児RhD血液型診断法の確立

日本RhD阴性基因型探索：母血胎儿RhD血型诊断方法的建立

• 批准号: 17K11253
• 负责人: 那須 美智子
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K11253/
• 关键词: RhD; 血液型不適合姙娠; 出生前診断; RHD; 血液型不適合妊娠; 遺伝子; ゲノム; 血液型

本邦のRhD血液型不適合姙娠のハプロタイプ決定のため、当初日本人のRhD陰性のRhD遺伝子欠失の割合とRHD遺伝子変異の関連を明らかにすることを目的とした。RhD陰性のサンプルに対してExon8.10の有無を確認し、 Exon8のみ(RHCEと同一の配列のためinternal controlになる)バンドを検出したものと、Exon8.10を検出したものに区別した。前者はRHD*01N.01を持つと仮定し、後者はさらにExon7.9及びc.1227G>Aを調べ、RHD*01EL.01とRHD*01N.04(その他のhybrid alleleの可能性も極わずかある)の区別を行った。この検討より、 90%のRhD陰性を遺伝子型で確認可能であることが示された。ついで、Hybrid RH boxはRHD*01N.01の存在証明になるため、全てのサンプルに対して Hybrid RH boxの確認を行い、c.1227G>Aを持つと判定したサンプルに関してはDirect sequenceを行いpoint mutationの存在を確認した。c1227G>Aはアジ ア人種に最も頻度が高いとされるalleleであり、Exon9のスプライシングアウトを生じさせるsilent mutationである29)。c1227G>A変異のpositionはRHD遺伝子上にあり、RHCE遺伝子との相同性の高さから、両方の領域を同時に増幅させるPrimer setを作成しinternal controlとして用いた。増幅された領域に含まれる3つの多型からRHD遺伝子とRECH遺伝子を区別することが可能であった。点変異を持つ母体の出生前診断の報告は少ないが、欠損型を含めて99%の妊婦におい て母体血によるcellーfree DNAを用いて次世代シーケンサーでも診断が可能であることが示された。

The RhD blood type in this country is not suitable for pregnancy determination, and the relationship between RhD negative gene deficiency and RHD gene variation in Japanese is clear. RhD Negative and Exon8.10 are present or absent, Exon8 is present (RHCE and same internal control), Exon8.10 is present or absent. The former is RHD*01N.01, the latter is Exon7.9 and c.1227G>A, RHD*01EL.01 and RHD*01N.04(all other hybrid allele possibilities). 90% of RhD negative sub-types are confirmed. The Hybrid RH box confirms the existence of RHD*01N.01 by confirming the existence of a point mutation in the Direct sequence. c1227G>A is a silent mutation that occurs when the highest frequency of loss occurs. c1227G>A different position on the RHD vector, RHCE vector and the identity of the high, square domain at the same time to increase the amplitude of the Primer set to create internal control and use The domain contains three types of RHD and RECH genes. Prenatal diagnosis is reported in 99% of pregnant women, and is possible in the next generation.