日本人のRhD陰性の遺伝子型の探索：母体血からの胎児RhD血液型診断法の確立

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本邦のRhD血液型不適合姙娠のハプロタイプ決定のため、当初日本人のRhD陰性のRhD遺伝子欠失の割合とRHD遺伝子変異の関連を明らかにすることを目的とした。RhD陰性のサンプルに対してExon8.10の有無を確認し、 Exon8のみ(RHCEと同一の配列のためinternal controlになる)バンドを検出したものと、Exon8.10を検出したものに区別した。前者はRHD*01N.01を持つと仮定し、後者はさらにExon7.9及びc.1227G>Aを調べ、RHD*01EL.01とRHD*01N.04(その他のhybrid alleleの可能性も極わずかある)の区別を行った。この検討より、 90%のRhD陰性を遺伝子型で確認可能であることが示された。ついで、Hybrid RH boxはRHD*01N.01の存在証明になるため、全てのサンプルに対して Hybrid RH boxの確認を行い、c.1227G>Aを持つと判定したサンプルに関してはDirect sequenceを行いpoint mutationの存在を確認した。c1227G>Aはアジ ア人種に最も頻度が高いとされるalleleであり、Exon9のスプライシングアウトを生じさせるsilent mutationである29)。c1227G>A変異のpositionはRHD遺伝子上にあり、RHCE遺伝子との相同性の高さから、両方の領域を同時に増幅させるPrimer setを作成しinternal controlとして用いた。増幅された領域に含まれる3つの多型からRHD遺伝子とRECH遺伝子を区別することが可能であった。点変異を持つ母体の出生前診断の報告は少ないが、欠損型を含めて99%の妊婦におい て母体血によるcellーfree DNAを用いて次世代シーケンサーでも診断が可能であることが示された。