非侵襲性検体(血液、尿)からの異常型タウタンパク質の特異的な増幅法の開発

开发非侵入性标本（血液、尿液）中异常 tau 蛋白的特异性扩增方法

• 批准号: 17K19460
• 负责人: 布施 隆行
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-06-30 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K19460/
• 关键词: 認知症; 異常型たんぱく質; 凝集体; 神経変性; タウ; アミロイド; 脳神経疾患; 蛋白質; 痴呆

背景および目的。超高齢化社会における我が国において、認知症は深刻な社会問題となっている。認知症は、脳内に難溶性タンパク質がアミロイド凝集物として蓄積する神経変性疾患である。患者の脳や脊髄液では、認知症の発症前から、アミロイドが増加することから、早期鑑別診断する上で、これらを検出することは極めて重要になる。本研究では、認知症において特徴的な病理像を示す神経原繊維変化の主要タンパク質であるタウに着目した。タウは、アルツハイマー型認知症や前頭側頭様変性症など、さまざまな疾患で蓄積が認められている。早期発見、早期治療を目指し、我々が独自に開発したQuaking induced conversion (QuIC)法を応用し、タウを標的とした非侵襲性検体(血液、尿)からの超早期診断法の確立を目指す。研究方法および結果。全長タウを含むcDNAはpETベクターに挿入し、sequence解析により配列確認を行った。タウのアミロイド形成には、C末端側に存在する4 repeat domains (R1-4)が強く関与している。本研究では、欠損型として4R(R1-4領域)のみ、また、R2領域を除いた3R(R1,3,4)のみを発現するPlasmid DNAの作製に着手した。また、R3の316番目のアミノ酸配列をセリン（S）からプロリン（P）に置換した変異型S316Pタウを全長および欠損型において、遺伝子組み換えを試みた。全長cDNAタウは、大腸菌に形質転換し、増殖させた後、組み換えタンパク質の作成を試みた。集菌した後、熱変性を加え、菌膜を破壊、遠心分離により抽出液を回収し、組み換え型タウの存在をSDS-PAGEで確認した。今後、他の欠損型および変異型の遺伝子改変が終了後、それぞれの組み換え型タンパク質の作成へ着手していく段階となった。

Background and purpose. Hyper-socialized society, cognitive disorder, profound social problems Cognitive disorders are caused by the accumulation of insoluble aggregates in the brain. It is very important for patients to have spinal fluid, cognitive disorders, and early differential diagnosis. The pathological features of cognitive disorders in this study indicate the main characteristics of neurogenesis. It's called cognitive disorder. It's called cognitive disorder. Early detection, early treatment, and the development of independent Quaking induced conversion (QuIC) methods are important indicators for the establishment of ultra-early diagnostic methods for non-invasive tissues (blood, urine). Research methods and results. The full-length cDNA contains the sequence analysis and sequence confirmation. 4 repeat domains (R1-4) are present on the C-terminal side of the ring. In this study, Plasmid DNA production was initiated in 3R (R1,3,4) except for 3R(R1,3,4) in R1-4 domain. R3 and R316 are different types of acid. The total length of the acid is different from that of R316 and the loss of R316 is different. The full-length cDNA was transformed into E. coli, and then cloned into E. coli. After the collection, the thermal properties were added, the bacterial membrane was broken, and the extract was recovered from the remote separation. The existence of the component was confirmed by SDS-PAGE. In the future, after the completion of the transformation of his defective type, he will start to change the quality of his products.