新しい超解像ライブイメージングシステムの開発と多繊毛協調運動メカニズムの解析

新型超分辨率实时成像系统的研制及多纤毛协调运动机制分析

• 批准号: 18J22965
• 负责人: 加納 初穂
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J22965/
• 关键词: 超解像顕微鏡; ライブイメージング; 気管多繊毛上皮細胞; 平面内細胞極性; オートフォーカス技術; 細胞生物学

本研究は、マウス気管多繊毛上皮細胞を研究対象とし、先駆的超解像ライブイメージング技術を用いることにより、気管多繊毛協調運動成立過程の詳細な動態観察と、新たに発見した上皮細胞表層骨格の解析を行い、平面内細胞極性と繊毛基底小体の配列・方向性の間に存在する秩序形成メカニズムを明らかにすることを目的とするものである。５日間に渡る気管多繊毛上皮細胞の秩序形成過程を研究対象とするため、５日間の長期ライブイメージングを行うわけであるが、顕微鏡下で観察対象がランダムに上下に動くので、これまでは24時間人が張り付き、人力でフォーカスを合わせ続ける必要があった。本年度の特筆すべき進歩としては、これまでになかった新たなオートフォーカスの技術をオリンパス社との共同研究のもと新規に開発し、ライブイメージングの自動化に成功したことである。またこの技術の論文発表を目指して執筆までの計画を立て、本論文発表のためのデータ取得を試みた。また本研究の根幹をになう、繊毛基底小体及び基底小体の方向性を示すBasal footの両方を、蛍光タンパク質でラベリングされたトランスジェニックマウスが、所属研究室内メンバーとの共同研究により樹立された。このトランスジェニックマウスから初代培養した気管多繊毛上皮細胞を用いた、繊毛基底小体及びBasal footを同時に動態観察する二色ライブイメージングに取り掛かりつつある。またBasal footの配列において重要な役割を果たす上皮細胞表層骨格に関わるタンパク質について、論文執筆をすすめており、論文投稿段階に至っている。

这项研究旨在研究小鼠气管多层上皮细胞，并通过使用开拓性的超分辨率实时成像技术来进行详细的观察，对气管多层配位运动过程的动力学进行详细观察，并分析新发现的上皮细胞表面骨架的序言和陈述的机制，并分析新发现的阶层，并阐明了阶段的机制，并阐明了exteriention of Existion of Existition of Existiention of Existientiention instriention。纤毛基体。为了研究五天内多季度上皮细胞的秩序形成过程，进行了五天的长期实时成像，但是随着观察受试者在显微镜下随机移动，人们必须坚持24小时，并手动进行焦点。今年的一个值得注意的进步是，以前从未见过的新自动对焦技术是在与Olympus的联合研究下开发的，并成功地自动化了实时成像。我们还计划撰写有关该技术的论文，旨在介绍一篇论文，并试图获取本文的数据。此外，由荧光蛋白标记的转基因小鼠，两者的基础脚，代表纤毛基础体的方向和构成本研究基础的基底体的方向，都是通过与附属实验室成员的联合研究建立的。我们开始使用从这些转基因小鼠中培养的基本培养的气管多乳细胞进行双色实时成像，其中同时纤毛基底体和基底脚动力学。他还致力于撰写有关与上皮细胞表面骨骼有关的蛋白质论文，该蛋白质在基础脚的序列中起着重要作用，并已达到纸提交阶段。