Oncomir miR-21による癌幹細胞の制御機構の解明

Oncomir miR-21阐明癌症干细胞的控制机制

• 批准号: 23701064
• 负责人: 三沢 彩
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23701064/
• 关键词: microRNA; 前立腺癌; AR受容体; アンドロゲン; 次世代シーケンサー

申請者らは、microRNA-21 (miR-21)が乳癌細胞株の癌幹細胞様SP (Side Population)細胞で過剰発現しており、SP細胞の抗癌剤耐性に関わっていることを明らかにしている。本研究ではRNA-seqやChip-seqの次世代シーケンサーを活用し、各種癌細胞や関連する癌幹細胞においてmiR-21と関連しうるmiRNAの発現と機能解析を行うことを目的とした。平成23年度ではアンドロゲン受容体(AR)陽性の前立腺癌細胞株LNCaP、及び抗アンドロゲン薬Bicalutamide耐性の細胞株二種類を用いてRNA-seq解析を行い、アンドロゲンで発現が誘導されるmiRNAの解析を行った。既報のmiR-21以外にアンドロゲンによって強く誘導されるmiRNAを三種類同定した。定量的RT-PCR法によりこれらのmiRNAはLNCaPと比較して耐性株でよりアンドロゲン応答性が高かったことを見出した。miRNAの一次及び二次前駆体(pri, pre miRNA)のアンドロゲン応答性を検証し、ChIP-Seq解析・ChIPアッセイによりこれらのmiRNAのゲノム近傍にAR結合領域を同定・検証し、miRNAの上流制御因子としてARが機能していることを見出した。配列情報からmiRNAの候補標的遺伝子を検索した。miRNAオリゴを用いた過剰発現系においては標的遺伝子のmRNA及びタンパクの減少が認められ、標的遺伝子の3'UTR miRNA認識配列を含むベクターを用いたレポーターアッセイによって標的遺伝子がこれらのmiRNAの下流制御因子であることを検証した。前立腺癌においてはホルモン応答におけるmiRNAの役割について不明な点が多く残されているが、本研究により治療抵抗性を獲得した前立腺癌細胞や癌幹細胞におけるmiRNAの関与について明らかになることが期待される。

申请人表明，MicroRNA-21（miR-21）在乳腺癌细胞系的癌症干细胞样SP（侧种群）细胞中过表达，并且参与SP细胞中的抗癌药物耐药性。这项研究旨在利用下一代RNA-seq和ChIP-Seq序列仪分析在各种癌细胞和相关癌症干细胞中可能与miR-21相关的miRNA的表达和功能。在2011年，使用两种对雄激素受体（AR）和抗雄激素药物抗二酰胺耐药细胞系的细胞系进行RNA-SEQ分析，并分析了由雄激素诱导的miRNA。除了先前报道的miR-21外，还鉴定出了三种由雄激素诱导的miRNA。定量RT-PCR方法表明，与LNCAP相比，这些miRNA在抗性菌株中具有更多的雄激素反应。通过CHIP-SEQ分析和CHIP分析，在这些miRNA基因组的附近鉴定和验证了miRNA（PRI，PRI MIRNA）和AR结合区域的原发性和二级前体的雄激素反应性，并发现AR充当miRNA的上游调节剂。序列信息用于寻找miRNA的候选靶基因。使用miRNA寡素观察到在过表达系统中观察到靶基因的mRNA和蛋白质的降低，并通过使用含有靶基因的3'UTR miRNA识别序列的向量来证实，靶基因是这些miRNA的下游调节剂。尽管关于miRNA在激素反应在前列腺癌中的作用仍然存在许多未知数，但预计该研究将揭示miRNA参与获得治疗性治疗性的前列腺癌细胞和癌症干细胞。

项目成果

次世代シーケンサーを用いた前立腺がん細胞株におけるmiRNAの発現解析

使用下一代测序仪分析前列腺癌细胞系中的 miRNA 表达

• 发表时间: 2012
• 作者: 山本順司;徳永彩未;下岡順直;三沢彩
• 通讯作者: 三沢彩