Oncomir miR-21による癌幹細胞の制御機構の解明

Oncomir miR-21阐明癌症干细胞的控制机制

• 批准号: 23701064
• 负责人: 三沢 彩
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23701064/
• 关键词: microRNA; 前立腺癌; AR受容体; アンドロゲン; 次世代シーケンサー

申請者らは、microRNA-21 (miR-21)が乳癌細胞株の癌幹細胞様SP (Side Population)細胞で過剰発現しており、SP細胞の抗癌剤耐性に関わっていることを明らかにしている。本研究ではRNA-seqやChip-seqの次世代シーケンサーを活用し、各種癌細胞や関連する癌幹細胞においてmiR-21と関連しうるmiRNAの発現と機能解析を行うことを目的とした。平成23年度ではアンドロゲン受容体(AR)陽性の前立腺癌細胞株LNCaP、及び抗アンドロゲン薬Bicalutamide耐性の細胞株二種類を用いてRNA-seq解析を行い、アンドロゲンで発現が誘導されるmiRNAの解析を行った。既報のmiR-21以外にアンドロゲンによって強く誘導されるmiRNAを三種類同定した。定量的RT-PCR法によりこれらのmiRNAはLNCaPと比較して耐性株でよりアンドロゲン応答性が高かったことを見出した。miRNAの一次及び二次前駆体(pri, pre miRNA)のアンドロゲン応答性を検証し、ChIP-Seq解析・ChIPアッセイによりこれらのmiRNAのゲノム近傍にAR結合領域を同定・検証し、miRNAの上流制御因子としてARが機能していることを見出した。配列情報からmiRNAの候補標的遺伝子を検索した。miRNAオリゴを用いた過剰発現系においては標的遺伝子のmRNA及びタンパクの減少が認められ、標的遺伝子の3'UTR miRNA認識配列を含むベクターを用いたレポーターアッセイによって標的遺伝子がこれらのmiRNAの下流制御因子であることを検証した。前立腺癌においてはホルモン応答におけるmiRNAの役割について不明な点が多く残されているが、本研究により治療抵抗性を獲得した前立腺癌細胞や癌幹細胞におけるmiRNAの関与について明らかになることが期待される。

The applicant expressed the view that microRNA-21 (miR-21) was related to the development of SP (Side Population) cells in breast cancer cell lines and cancer stem cells. The purpose of this study is to analyze the expression and function of miRNA in cancer stem cells related to RNA-seq and Chip-seq in the next generation RNA-seq analysis and miRNA analysis were performed for two types of cell lines, LNCaP, which were previously adenocarcinoma cell lines that were AR positive, and Bicalutamide-resistant cell lines, in 2003. Three similar miRNA have been reported for miRs other than miR-21. The quantitative RT-PCR method was used to compare the miRNA with those of resistant strains. Identification of miRNA primiRNA and premiRNA responses, ChIP-Seq analysis, identification of miRNA binding domains near AR binding domains, identification of miRNA upstream control factors, and identification of miRNA AR functions. The list of miRNA candidates is displayed. miRNA expression system is used to identify the mRNA and protein expression of the target gene, and the 3'UTR miRNA expression system of the target gene is used to identify the mRNA and protein expression of the target gene. In the present study, we aim to obtain therapeutic resistance in prostate cancer cells and cancer stem cells.

项目成果

次世代シーケンサーを用いた前立腺がん細胞株におけるmiRNAの発現解析

使用下一代测序仪分析前列腺癌细胞系中的 miRNA 表达

• 发表时间: 2012
• 作者: 山本順司;徳永彩未;下岡順直;三沢彩
• 通讯作者: 三沢彩