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アルドステロンによる腎障害に対するセリンプロテアーゼの機能解明と治療応用

丝氨酸蛋白酶在醛固酮肾损伤中的功能阐明及治疗应用

基本信息

批准号：
23790948
负责人：
柿添豊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

片腎を摘出したラットにアルドステロンを皮下投与するとともに、8.0%NaCl食を負荷すると高血圧と腎障害を呈するが、同時にセリンプロテアーゼ阻害薬を投与することにより、有意な降圧と腎障害の軽減を認めた。このラットの腎蛋白を用いたセリンプロテアーゼ特異的Zymographyにより、対照群に比べ活性が著明に亢進した約80kDaのセリンプロテアーゼを認めた。腎蛋白を硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換クロマトグラフィーにより精製した後Zymographyを行い、当該セリンプロテアーゼ活性を認める部位をLC-MS/MSにより分析し、ある種のセリンプロテアーゼを同定した。当該セリンプロテアーゼをラット腎線維芽細胞の培養上清に添加するとTGF-b1、PAI-1、MCP-1、TNF-a等のサイトカインの発現亢進を認め、このセリンプロテアーゼが腎障害を誘導していると考えられた。セリンプロテアーゼ阻害薬はin vitroの系において当該セリンプロテアーゼ活性を抑制し、線維芽細胞における線維性・炎症性サイトカインの発現誘導を抑制した。セリンプロテアーゼによる組織障害にprotease activated receptor (PAR)が関与しているとの報告があり、腎線維芽細胞において発現を認めたPAR-1,2および3を個々にもしくは同時にknock downしたが、当該セリンプロテアーゼによるサイトカイン誘導に変化は認めず、他の機序を介していると考えられた。本研究によりアルドステロンと食塩により腎組織中に誘導されるセリンプロテアーゼが増悪因子として作用しており、セリンプロテアーゼ阻害薬がこのプロテアーゼの活性を抑制することで降圧・腎保護作用を発揮していると考えられた。今後はさらにこのプロテアーゼの活性亢進およびプロテアーゼによる腎障害誘導の機序を解明するため研究を継続する予定である。

The kidney is removed and administered subcutaneously, and 8.0% NaCl is administered to the kidney with high blood pressure. Obstacle するが, simultaneous にセリンプロテアーゼ hinder 薬をinvestment and することにより, intentional なdrop pressure とkidney obstruction の軽reduce をcognize めた.このラットの Kidney protein を uses いたセリンプロテアーゼspecific Zymography により, 対毾群に比べactivityが出明に Hyperactivityしたabout 80kDaのセリンプロテアーゼをcognitionめた. Kidney protein sulfate アンモニウムShenden, イオン exchange クロマトグラフィーにより refined した后Zymography を行い, when The active part of the セリンプロテアーゼidentification and LC-MS/MS analysis of the によりし, and the あるkind of のセリンプロテアーゼを same as the determination. When the culture supernatant of the セセリンプロテアーゼをラットrenal fibroblast cells was added with TGF-b1, PAI-1, MCP-1, TNF-a, etc., can cause hyperactivity of TNF-a, cause kidney damage, and cause kidney damage.セリンプロテアーゼ hinder 薬はin The activity of the in vitro system is suppressed, and the activity of the stem cells is inhibited, and the fibroblasts are induced and the inflammatory cells are induced.セリンプロテアーゼによるprotease activated receptor (PAR) PAR-1,2および3を一々にもしくはsimultaneouslyにknock downしたが、when should be done?ンinducing に変化はcognitionめず、his Mechanical sequence を Introduction していると考えられた. In this study, によりアルドステロンと食桩により was induced in kidney tissue.されるセリンプロテアーゼがincreasing factor としてeffect しており,セリンプロテアーゼ Hindrance 薬がこのプロテアーゼのActivityをSuppression It can reduce pressure and protect kidneys. From now on, the activity of the future will be high The mechanism for inducing renal impairment is explained and studied, and the procedure is determined.