Runx2/Cbfa1の核内移行制御を基盤とした骨芽細胞分化誘導技術の創生

基于Runx2/Cbfa1核易位控制的成骨细胞分化诱导技术的创建

• 批准号: 23792277
• 负责人: 中村 誠志
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23792277/
• 关键词: 骨芽細胞; Runx2/Cbfa1; 核内移行; 細胞分化; 間葉系幹細胞

間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化には,転写因子「Runx2/Cbfa1」の発現およびその核内移行が必須である。Runx2/Cbfa1の転写活性が行われる際,Runx2/Cbfa1は輸送担体によって細胞質から核内に輸送されるが,その詳細なメカニズムについては十分に解析されていない。本研究は,骨芽細胞分化におけるRunx2/Cbfa1の核内移行機構を解明し,核内移行を担う輸送因子を人為的に操作することにより,骨組織の再生を誘導する技術を開発することを目的としている。本年度は,細胞にRunx2/Cbfa1を強制発現させる系を確立するために,レンチウイルスGateway system (invitrogen)を用いた遺伝子導入法に用いるベクターの構築を行った。完全長マウスcbfa1をPCRでクローニングし,Gateway systemのエントリーベクターを作製した。このエントリーベクターを用いてLR反応によって発現ベクター(pcDNA3.1/nV5-DEST)を作製し,これをリポフェクタミン法によって,HEK293A細胞に導入した。その後,PCRおよびウエスタンブロッティングを用いてRunx2/Cbfa1が実際に細胞に恒常的に発現していることを確認した。次に,この発現ベクターをマウス由来間葉系幹細胞に同様に導入し,骨芽細胞分化が促進することを,RT-PCR解析,アルカリフォスファターゼ染色およびフォンコッサ染色を用いて確認した。今後,Runx2/Cbfa1の核移行シグナルと考えられる領域(basic domain)を中性アミノ酸配列に変異させたRunx2/Cbfa1の発現ベクターを作製する予定であったが,申請者の辞職に伴う科学研究費応募資格の喪失により実験を終了するに至った。

The differentiation of bone germ cells is very difficult, and the factor "Runx2/Cbfa1" shows that the migration in the nucleus must be affected. Runx2/Cbfa1 write activity line, Runx2/Cbfa1 carrier, cell, cell, nucleus, cell, cell, In this study, the differentiation of bone germ cells, the mechanism of Runx2/Cbfa1 migration in the nucleus was explained, the transfer factors in the nucleus were responsible for the artificial operation of bone bud differentiation, and bone tissue regeneration led to the development of bone tissue regeneration. This year, the Runx2/Cbfa1 is required to make sure that the information is available, and that the Gateway system (invitrogen) is used for the purpose of making sure that the information is available. The full length of the cbfa1 PCR system will improve the performance, while the Gateway system will improve the performance of the system. Please tell me that you need to use the LR to make sure that you have a problem (pcDNA3.1/nV5-DEST), that is, you need to know how to do this, and the HEK293A cell will enter the computer. After that, the PCR will make sure that it is confirmed by using the usual Runx2/Cbfa1 information. For the second time, the cause of the disease is that the cells are involved in the same way, the differentiation of bone buds promotes the differentiation of bone buds, and the RT-PCR analysis indicates that the staining is confirmed by the method of staining. From now on, the Runx2/Cbfa1 nuclear transfer program will be completed in the field of research (basic domain). In the neutral domain (basic domain), there will be a predetermined payment in the field of Runx2/Cbfa1, and the applicant will make a reservation in conjunction with the scientific research program.

项目成果

Relationship between the expression of nuclear import machineries for myocardin and vascular smooth muscle cell phenotype

心肌素核输入机制的表达与血管平滑肌细胞表型的关系

• 发表时间: 2011
• 作者: Nakamura S;Hayashi K;Iwasaki K;Fujioka T;Egusa H;Yatani H;Sobue K
• 通讯作者: Sobue K