ＨＩＶ遺伝子検査のための新しい標準物質の開発

HIV基因检测新标准物质的研制

• 批准号: 24590673
• 负责人: 吉田 繁
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24590673/
• 关键词: HIV; 標準化; HIV薬剤耐性検査

薬剤に耐性を獲得したHIV（耐性HIV）の出現が適切な治療の障害となっている．そのため，HIV薬剤耐性検査や指向性検査により適切な治療薬を選択することが重要であるが，本検査は施設により性能が異なることが問題である．そこで, 外部精度管理による施設間差の是正と性能評価が求められているが，標準物質として複数のHIVが混在している可能性のある患者血漿が用いられているため，正しい評価は困難である．本研究では合成RNAを用いて，配列情報が明確な新たな標準物質の開発を目指した．HCV 5’UTRの一部遺伝子配列を組み込んだ転写用ベクターpGEM-HCVを作製した．国内外で薬剤耐性検査に使用されているプライマー設定位置をもとに，それら全プライマーと解析配列1017bpを含むHIV gag-pol領域を増幅するプライマーを設計した．このプライマーを用いて耐性HIVと野生型HIV RNAから約4 kbpのフラグメントを増幅し，pGEM-HCVに組み込んだ．T7 RNAポリメラーゼによりHIV gag-pol-HCV 5’UTR RNAを転写精製後，凍結乾燥し標準物質とした．標準物質のRNA量はCobas TaqMan HCVによる3重測定により決定した．塩基配列は国内で実施されているHIV薬剤耐性検査3方法を用いて，同一の塩基配列であることを確認した．また，耐性HIVと野生型HIV由来の標準物質をRNA量から特定の比率に混合した標準物質を作製した．この混合標準物質を用いて3方法の性能比較をした結果，方法により検出可能な比率が異なることが確認された．今回の研究では1)標準物質作製のベースとなるベクターを作製し，2)標準物質の作製方法を確立し，3)方法による検出感度の違いを明らかにした．

The development of HIV tolerance and the emergence of appropriate treatment barriers. HIV drug resistance test, directional test, selection of appropriate therapeutic drug, important test, performance test, problem test. The difference between the external precision management and the application is positive and the performance evaluation is difficult. In this study, synthetic RNA was synthesized and the alignment information was used to clarify the development of new reference materials. Part of HCV 5 'UTR gene alignment was organized and written in pGEM-HCV. For the domestic and international drug resistance test, the use of the drug resistance test is limited to the setting position, including the full range of drug resistance test, the analysis and arrangement of 1017bp, and the increase of HIV gag-pol field. HIV gag-pol-HCV 5 ′ UTR RNA was purified and freeze-dried after purification. The amount of RNA in the standard substance was determined by the three-fold assay of Cobas TaqMan HCV. HIV resistance test 3 methods for gene alignment in China The standard substance for the origin of resistant HIV and wild-type HIV was prepared by mixing the standard substance with RNA in a specific ratio. The results of the performance comparison of the three methods used for this mixed reference material show that the method can detect the possible ratio difference. The present study includes: 1) the preparation of reference materials, 2) the establishment of preparation methods of reference materials, 3) the identification of sensitivity and the identification of violations.

项目成果

HIV薬剤耐性検査の外部精度管理

HIV耐药性检测的外部质量控制

• 发表时间: 2012
• 作者: 西浦弘志;山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;千場梅子，諶 俊，西浦弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;山本哲郎;定岡知彦;吉田 繁;吉田 繁;吉田 繁
• 通讯作者: 吉田 繁

2011年度HIV薬剤耐性検査外部精度管理の報告

2011年HIV耐药检测外部质控报告

• 发表时间: 2012
• 作者: 西浦弘志;山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;千場梅子，諶 俊，西浦弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;山本哲郎;定岡知彦;吉田 繁
• 通讯作者: 吉田 繁

In vitro transcribed RNAを用いたHIV薬剤耐性検査の外部精度管理

使用体外转录 RNA 进行 HIV 耐药性检测的外部质量控制

• 发表时间: 2012
• 作者: 西浦弘志;山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;千場梅子，諶 俊，西浦弘志，山本哲郎;西浦 弘志，山本哲郎;山本哲郎;定岡知彦;吉田 繁;吉田 繁
• 通讯作者: 吉田 繁