非小細胞肺癌幹細胞における分泌型miRNAの同定とその治療応用へ向けての解析

非小细胞肺癌干细胞分泌miRNA的鉴定及其治疗应用分析

• 批准号: 24592078
• 负责人: 加藤 達哉
• 金额: $ 3.49万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24592078/
• 关键词: 癌

我々は、癌幹細胞に特化した「分泌型miRNA」に着目し、「非小細胞肺癌幹細胞における分泌型miRNAの同定とその治療応用へ向けての解析」というテーマで平成24年4月より研究を開始した。まず非小細胞肺癌における癌幹細胞の最も良いsorting方法を検討するため種々の方法を試みたが、中でも我々はsphere形成能を持つ癌細胞がマウス皮下腫瘍形成能を高率に有することに着目した。まず肺癌細胞株を用いてsphere形成能を持つ肺癌幹細胞の培養条件検討を行い、足場非依存性のためにpolyHEMA coatedを使用し、またserum-free、EGF+bFGF+ITS premixの培養液を用いて限界希釈を行ったのち培養を継続することで、同細胞群は約1ヶ月に渡りsphere形成能を維持したまま生育することを見出した。次に培養上清中の癌幹細胞における特異的な分泌型miRNAの検索として、マイクロアレイによる解析を行う方針とした。先に述べたsphere形成能を有する細胞群の培養上清と通常の肺癌細胞培養上清におけるmiRNA発現プロファイルを比較検討するため、両群の培養上清よりキットを用いてmiRNAの抽出を行った。細胞株レベルで条件検討が終了し、実際の臨床検体において同様の研究を開始する予定で倫理申請まで行っていたが、筆頭研究者である加藤達哉が海外へ留学することとなり、今回やむなく研究中止の申請をするに至った。

I 々 は, cancer stem cells に specialized し た "secretion of micrornas" に し, "non-small cell lung cancer stem cells に お け る secretory type of micrornas の with fixed と そ 応 の treatment with へ to け て の parsing" と い う テ ー マ で pp.47-53 April 24 years よ り research を start し た. ま ず non-small cell lung cancer に お け る の cancer stem cells is the most good も い sorting method を beg す 検 る た め kind 々 の way を try み た が, medium で も I 々 は sphere formation を hold つ cancer cells が マ ウ ス subcutaneous swollen sores can form を high rate に す る こ と に with mesh し た. ま ず lung cancer cell lines を with い て sphere can form を hold つ の lung cancer stem cells culture conditions 検 field of dependency, foot line for を い の た め に polyHEMA coated を use し, ま た serum - free, EGF + bFGF + ITS Premix を の broth with い て limit when 釈 を line っ た の ち cultivate を 継 続 す る こ と で ヶ は about 1 month, with the cell group に crossing り sphere formation can を し た ま ま fertility す る こ と を see out し た. Time に の cancer stem cells in culture supernatant に お け る type specific な secretion of micrornas の 検 cable と し て, マ イ ク ロ ア レ イ に よ る parsing line を う policy と し た. に first mentioned べ た sphere formation can have す を る cell group の culture supernatant と usually の lung cancer cell culture supernatant に お け る micrornas 発 now プ ロ フ ァ イ ル を compare beg す 検 る た め, struck group の culture supernatant よ り キ ッ ト を with い て micrornas の spare line を っ た. Cell lines レ ベ ル 検 で conditions for が し, the end of the event be の clinical 検 body に お い て with others の research を start す る designated で ethics application ま で line っ て い た が common researchers で あ る kato of zai が overseas study へ す る こ と と な り, today back to や む な く study suspension の application を す る に to っ た.