Development of photoimmunotherapy via O-glycans and siRNA delivery system using iRGD nanoparticles in lung cancer

使用 iRGD 纳米颗粒通过 O-聚糖和 siRNA 递送系统开发肺癌光免疫疗法

• 批准号: 21K08876
• 负责人: 加藤 達哉
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08876/
• 关键词: がん糖鎖抗原; 光免疫療法; ナノ粒子; siRNA送達; 肺癌

今年度はMUC1-Tn高発現株である肺癌細胞株RERF-LC-KJ,H2228、乳癌細胞株T47D,ZR75-1 、低発現株であるA549細胞を用いてin vitro実験を行った。MUC1-Tn抗体(SN101, SN102)とIR700を1:5の割合とし、精製後一抗体当たりIR700が2.10-2.25分子程度結合していることを確認した。MUC1-Tn抗体-IR700は細胞添加後すぐにはイメージングできず、24時間後が一番適切であり、細胞膜へ結合した状態ではなく、細胞内へ取り込まれた状態であった。照射時間は5分程度(45J)でブレブ形成・細胞の膨張が認められ、10分(90J) で十分であった。さらに細胞膜のMUC1-Tn発現量評価を目的として、MUC1-Tn抗体とIR700を1:10の割合、さらにMUC1-Tn抗体とAF488を1:15の割合とし、一抗体当たりIR700が3.76分子程度、AF488が2.58分子程度結合していることを確認し、FACS解析を行った。高発現株では明らかな右方移動を認めた。また低発現株A549もわずかに右方移動を認め、MUC1-Tn抗体の細胞膜への結合を確認した。次に近赤外線90J照射でタイムラプス解析を行ったところ、ブレブ形成・細胞の膨張が認められ、特にT47D細胞では著明な細胞死を確認した。MTTアッセイでdose-dependentにcell viabilityの低下が認められた。次にIn vivoの実験でT47D（C.B17.SCIDマウス）およびZR-75-1（NOD SCIDマウス）のXenograftモデルを用い、SN102-IR700(100μg/匹)を尾静注し、50J近赤外光による照射を行った。病理検査にて、SN102-IR700投与→照射群において照射した腫瘍内部で腫瘍細胞の消失像をみとめ、著明な治療効果を確認できた。

This year, MUC1-Tn high-developing strain was used in lung cancer cell lines RERF-LC-KJ,H2228, breast cancer cell lines T47D, ZR75 -1, and low-developing strain A549 cells. MUC1-Tn antibodies (SN101, SN102) and IR700 are 1:5 split and purified, and the molecular level of IR700 is 2.10-2.25. MUC1-Tn Antibody-IR700 is added to the cells and then transferred to the cell membrane 24 hours later. Irradiation time is 5 minutes (45J), cell swelling is 10 minutes (90J), and cell growth is 10 minutes (90J). For the purpose of quantitative evaluation of MUC1-Tn expression in cell membranes, MUC1-Tn antibody binds to IR700 at a ratio of 1:10, MUC1-Tn antibody binds to AF488 at a ratio of 1:15, and one antibody binds to IR700 at a molecular level of 3.76 and AF488 at a molecular level of 2.58. FACS analysis was performed. High rise plant The binding of MUC1-Tn antibody to cell membrane was confirmed. Next, near infrared ray 90J irradiation can be used to analyze the cell growth and cell death of T47D cells MTT is a dose-dependent cell with low viability. In vivo, T47D (C.B17.SCID) and ZR-75-1 (NOD SCID) were administered intravenously, SN102-IR700 (100μg/pc) was administered intravenously, and 50J was irradiated with near-infrared light. Pathological examination, SN102-IR700 injection → irradiation group irradiation, tumor cell disappearance image, irradiation, treatment effect confirmation