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Ｓｏｘ９を活性化する薬剤を用いた軟骨欠損・変性疾患に対する治療法の開発

使用激活 Sox9 的药物开发软骨缺陷和退行性疾病的治疗方法

基本信息

批准号：
24592259
负责人：
金子浩史
金额：
$ 3.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

SOX9は軟骨基質の形質維持に極めて重要であり、SOX9の発現を促進することにより軟骨変性の防止あるいは変性軟骨の修復が期待できる。マウス軟骨前駆細胞株ATDC5にSOX9プロモーター領域を挿入したベクターをトランスフェクションし定常発現株を作成した。ATDC5はインスリン添加により未分化間葉系細胞から軟骨細胞へ分化することが知られている。作成した定常発現株も通常のATDC5と同様にインスリン添加により軟骨多段階分化モデルが作成できることを確認した。SOX9を活性化する薬剤を同定する目的で1200種類のスクリーニング用薬剤（Prestwick Chemical社）を用いたルシフェラーゼアッセイによる薬効1次スクリーニングを行い候補薬剤を48種類に絞り、2次にて16薬剤、さらに3次にて濃度依存性を認めた4薬剤に絞った。4次スクリーニングとして、正常ATDC5に4薬剤を添加し、定量的RT-PCR 法によりSOX9およびその下流に位置するII型コラーゲンおよびアグリカンのmRNA 発現を検討した。また、軟骨のプロテオグリカンを評価するためアルシアンブルー染色を行い、吸光度測定により定量化した。その結果、抗アレルギー剤Xがコントロール（ジメチルスルホキシドのみ添加）と比較して10～100μMの範囲で濃度依存性にSOX9、II型コラーゲンおよびアグリカンのmRNAを上昇させ、さらにプロテオグリカン含有量を増加させていた。

SOX9 is extremely important for the maintenance of the form and quality of the cartilage matrix, and it is expected to promote the occurrence of SOX9, prevent cartilage degeneration, and repair cartilage degeneration. The cell line ATDC5 was established as a regular growth cell line. ATDC-5 is the first cell line to differentiate from undifferentiated mesenchymal cells to chondrocytes. To create a stable plant, usually ATDC5, add cartilage multi-stage differentiation, and confirm it. SOX9 is activated by 1200 kinds of chemicals (Prestwick Chemical). It is used by 48 kinds of chemicals, 16 kinds of chemicals and 3 kinds of concentration-dependent chemicals. The mRNA expression of SOX9 and SOX9 in the downstream region was investigated quantitatively by RT-PCR. Cartilages are evaluated by staining and quantified by absorbance measurements. As a result, SOX9 and SOX2 mRNA levels increased in a concentration-dependent manner over a range of 10 - 100μM, and SOX2 mRNA levels increased in a concentration-dependent manner over a range of 10 - 100μM.