レミフェンタニル耐性克服法の開発:二量体化オピオイド受容体脱感作の分子メカニズム

克服瑞芬太尼耐受的方法的开发：二聚阿片受体脱敏的分子机制

• 批准号: 24791599
• 负责人: 高田 正史
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24791599/
• 关键词: レミフェンタニル; 急性耐性; リサイクル機構; 二量体; 共焦点レーザ顕微鏡; FRET; ケタミン; オピオイド

レミフェンタニルの単量体および二量体化オピオイド受容体の活性化・脱感作に与える影響をIn Vitroにて明らかにすべく、μ-δオピオイド受容体などの二量体化受容体の活性化シグナルのみを測定し、二量体化受容体の脱感作ならびに受容体細胞内移行を可視化した。(1)二量体化オピオイド受容体のみのアッセイ(1)クローン化μ受容体のC末端、ならびにδ受容体のC末端に蛍光波長の異なる蛍光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP; cyan fluorescent protein, CFP)をそれぞれ連結させた受容体を作製(2)μ受容体、δ受容体活性を細胞内CaイメージングによりアッセイできるG蛋白キメラGqi5を連結(3)これらの融合クローンをBaby Hamster Kidney細胞に発現(1)(1)で作成したクローンを用いて受容体の細胞内局在を検討(免疫蛍光組織化学ならびに共焦点レーザによる受容体細胞内局在、ウェスタンブロットによる受容体二量体化の確認)した。(2)(2)で作成したクローンを用いて受容体刺激による細胞内カルシウム濃度上昇の可視化(カルシウムイメージング)を行い、さらにパッチクランプにて受容体活性を測定した。(2)レミフェンタニルの二量体化オピオイド受容体への影響の解析(1)で得られた、二量体受容体のみをアッセイできるシステムを用いて、レミフェンタニルの二量体化オピオイド受容体に対する反応性を比較解析するため、特に二量体化受容体に対する耐性形成様式の違いやメカニズムについて調査した。レミフェンタニル刺激前、細胞内移行後、リサイクリング後のμORとδORはいずれもFRETアッセイでヘテロ二量体を形成していた。高濃度レミフェンタニル刺激ではμOR、μ-δORのいずれもリサイクリングが阻害された。同じレミフェンタニル濃度では、μ-δORはμORよりリサイクリングされやすかった。以上より、μORおよびμ-δORのリサイクリンク障害が高濃度レミフェンタニルによる急性耐性の一因であり、μ-δORはμORより急性耐性を起こしにくい可能性が示唆された。

レ ミ フ ェ ン タ ニ ル の 単 quantity body お よ び 2 quantity body change オ ピ オ イ ド let body の activeness, feeling off from a に and え る influence を In Vitro に て Ming ら か に す べ く, mu - the delta オ ピ オ イ ド by let body な ど の 2 quantity body is changed by the capacity of body の activeness シ グ ナ ル の み を determination し, 2 quantity body by let body の off feeling な ら び に migration in the let somatic を visualization し た. (1) the second quantity body オ ピ オ イ ド by let body の み の ア ッ セ イ (1) ク ロ ー ン mu is let body の C terminal, な ら び に delta by let body の C terminal に の 蛍 wavelength different な る 蛍 light protein (yellow fluorescent protein, YFP; cyan fluorescent protein, CFP) を そ れ ぞ れ link さ せ た を let body from a system (2) mu by the capacity, the delta by the capacitance reactive を intracellular Ca イ メ ー ジ ン グ に よ り ア ッ セ イ で き る G protein キ メ ラ Gqi5 を link (3) こ れ ら の fusion ク ロ ー ン を Baby Hamster Kidney cells に 発 now (1) (1) で made し た ク ロ ー ン を with い て bureau in the の let body cells in を 検 please (immune histochemistry 蛍 light な ら び に total focus レ ー ザ に よ る bureau in the capacity cells in, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ る by let body 2 quantity body の confirmation) し た. (2) and (2) で made し た ク ロ ー ン を with い て under let body に よ る intracellular カ ル シ ウ ム concentration rising の visualization (カ ル シ ウ ム イ メ ー ジ ン グ) を い, さ ら に パ ッ チ ク ラ ン プ に て を determination by the capacity of body activity し た. (2) レ ミ フ ェ ン タ ニ ル の 2 quantity body change オ ピ オ イ ド by let body へ の effect の resolution (1) で ら れ た, 2 quantity body by let body の み を ア ッ セ イ で き る シ ス テ ム を with い て, レ ミ フ ェ ン タ ニ ル の 2 quantity body change オ ピ オ イ ド by let body に す seaborne る anti 応 sex を comparative analytic す る た め, に 2 quantity body is changed by the capacity of body に す seaborne る patience to form The pattern is in violation of the やメカニズムに やメカニズムに やメカニズムに て て investigation た た. レ ミ フ ェ ン タ ニ ル stimulation before and after cell migration, リ サ イ ク リ ン グ の after mu OR と delta OR は い ず れ も FRET ア ッ セ イ で ヘ テ を ロ 2 quantity body formation し て い た. High concentrations of レ ミ フ ェ ン タ ニ ル stimulus で は mu OR, mu - the delta OR の い ず れ も リ サ イ ク リ ン グ が resistance against さ れ た. With じ レ ミ フ ェ ン タ ニ ル concentration で は, mu - the delta OR は mu OR よ り リ サ イ ク リ ン グ さ れ や す か っ た. Above よ り, mu OR お よ び mu - delta OR の リ サ イ ク リ ン ク handicap of が high-concentration レ ミ フ ェ ン タ ニ ル に よ る acute patience の for で あ り, mu - the delta OR は mu OR よ り acute patience を up こ し に く が い possibility in stopping さ れ た.

项目成果

持続痛、突出痛の評価とタイトレーション～オピオイドによる低活動型せん妄が出現した症例～

持续性疼痛和爆发性疼痛的评价与滴定～阿片类药物引起的活动减退性谵妄一例～

• 发表时间: 2012
• 作者: 龍恵美、高田正史;ら
• 通讯作者: ら

GABA_B receptors do not internalize after baclofen treatment possibly due to lack of theβ-arrestin association ; a real-time visualization study

巴氯芬治疗后 GABA_B 受体不会内化，可能是由于缺乏实时可视化研究；

• DOI: 10.1002/syn.21565
• 发表时间: 2012
• 期刊: Synapse, Epub ahead of print
• 作者: Sudo;Y.;Hojo;M.;Ando;Y.;Takada;M.;Murata;H.;Kurata;S.;Kanaide;M.;Nishida;N.;Uezono;Y.
• 通讯作者: Y.

【オキシコドン製剤を使いこなす】 フェンタニル製剤からオキシコドン注射剤へ切り替えたがん疼痛の2症例

【掌握羟考酮制剂的使用】癌痛患者由芬太尼制剂改用羟考酮注射液2例

• 发表时间: 2012
• 期刊: がん患者と対症療法
• 作者: 高田 正史;北條 美能留;前川 拓治;三好 宏;澄川 耕二
• 通讯作者: 澄川 耕二

両側性の症候性舌咽神経痛を表現型とした悪性リンパ腫の一例

以双侧症状性舌咽神经痛为表型的恶性淋巴瘤一例

• 发表时间: 2012
• 作者: 高田正史;北條美能留;上園保仁;ら
• 通讯作者: ら