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Netsの概念に基づく２光子レーザー顕微鏡を用いた壊死性腸炎の病態解明と治療戦略

基于Nets概念的双光子激光显微镜阐明坏死性小肠结肠炎的病理学和治疗策略

基本信息

批准号：
25462771
负责人：
小池勇樹
金额：
$ 3万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25462771/
关键词：
壊死性腸炎二光子レーザー顕微鏡 Post capillary venule in vivo 微小循環不全

项目摘要

本研究では、第一にNECモデルの作成・観察を行う予定とした。まず、LPSの投与による生体内の変化を確認するため、腹腔内に致死量のLPSを注入し、経時的にGFPマウスの盲腸壁の微小循環を観察した。2光子レーザー顕微鏡の深部イメージの獲得という利点を活かして、同一個体で、盲腸壁の漿膜面から粘膜面までを同時間帯で観察するというユニークな方法で観察・記録（動画・静止画）と解析を行った。LPS投与により、急性期には、毛細血管還流後のPost capillary venuleにおいてのみ、白血球・血小板・血管内皮による相互作用でこれらの複合体が形成されていくことが判明したが、同一個体の同時間帯における毛細血管レベルでは、これらの複合体形成は全く認められなかった。さらに同Post capillary venuleにおける白血球のローリング数やローリングスピード、同血管レベルにおける血流速度や血管壁に与えるShear forceなどについても測定を行い、毛細血管レベルよりもPost capillary venuleにおいて、より早期にダイナミックな変化が発生していることが判明した。同成果は現在、論文投稿中である。今後、NECモデルにおいてLPS投与だけでなく、低酸素暴露を二光子レーザー顕微鏡での観察中に行うことにより、腸管壁内の微小血管において、微小血栓の形成や微小循環不全の発生過程をリアルタイムに評価する予定である。またNETs形成領域に露出・放出された物質(ヒストン/HMGB1/NOなど)について特異的蛍光抗体を用いて、リアルタイムに同定し定量化を行う予定である。さらにNECにおける薬剤等の治療効果だけでなく予防効果をも、分子レベルの解析だけでなくリアルタイムなin vivo解析と合わせることで、より信頼性の高い薬剤効果判定を可能とする予定である。

This study is the first to examine the feasibility of establishing a network. In vivo, LPS administration was confirmed. In vivo, lethal LPS was injected into the abdominal cavity. In vivo, GFP microcirculation was observed. 2. Photon microscopes for deep region acquisition, fine spot activation, same individual, cecal serous surface, mucosal surface simultaneous time zone observation, method observation, recording (animation, still drawing) and analysis. LPS administration in acute phase, Post capillary venule, leukocyte, platelet, vascular endothelium interaction, formation of complex, identification of complex, same individual at the same time, formation of complex, complete recognition of complex. In addition, the number of white blood cells in the same Post capillary vein, blood flow velocity in the same vessel, blood vessel wall, and Shear force in the same vessel were measured. The same results are now available, and the papers are submitted. In the future, NEC will be evaluated for LPS administration, hypoxia exposure, two-photon microscopy, microvascular damage in the intestinal wall, microthrombus formation, and microcirculatory insufficiency. The specific fluorescent antibody is used in the determination and quantification of the substances (HMGB1/NO) exposed and released in the formation field of NETs. For NEC, the therapeutic effect of the drug can be determined by analyzing the molecular structure and determining whether the drug is reliable or not.