１細胞・組織In-Situオンタイム薬物代謝解析法の開発

单细胞/组织原位实时药物代谢分析方法的建立

• 批准号: 25513013
• 负责人: 伊達 沙智子
• 金额: $ 3.16万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25513013/
• 关键词: 一細胞分析; 薬物代謝; 薬剤性肝毒性; 蛍光顕微鏡観察との組み合わせ; 再現性、定量制の向上; 分析の効率化; 薬剤肝毒性の評価

昨年度に引き続き、一細胞分析を高感度に定量的に分析する手法の開発を中心に行った。昨年度は一細胞の分析にフーリエ変換型質量分析計LTQ orbitrap Velos(Thermo社)、トリプル四重極型質量分析計QTRAP5500（ABSCIEX社）の両方を用いていたが、今年度は既知の薬物・薬物代謝物および内因性化合物の定量分析に絞った分析を行うためにQTRAP5500を使った解析法の改善を中心に行った。薬物（タモキシフェン）を投与した際に起こる薬物の代謝反応、および肝臓細胞内で起こる毒性発現を一細胞から得られたデータで分析できるように、測定のターゲットとなる分子の情報を過去の実験データや文献から収集し、約40分子を一度に定量する測定系の作成を目指した。各化合物の検量線を作成するために内部標準物質として13C、15Nなどで安定同位体標識体された種々の試薬をを購入した。安定同位体ラベル体を一定量各濃度の標準液に添加し、インフュージョンによりMRMを設定したのち、ナノスプレーチップで細胞内因性の化合物を分析する際の検量線の作成を行った。その結果、化合物ほとんどは定量的に分析できるものの、中にはバックグラウンドが大きく検出量と濃度に相関が見られないものもあった。このうち質量分析装置の設定変更により定量性が改善したものもあったが定量が不可能な化合物もいくつかあった。薬物およびその代謝物に関してはほぼ問題なく定量できることがわかった。一細胞で薬物代謝や薬物投与により細胞内で発現する毒性を検出する測定系の準備が整った。

In the past year, a cell analysis method was developed for high-sensitivity quantitative analysis. The QTRAP 5500 was developed for the improvement of analytical methods for quantitative analysis of known compounds, metabolites and endogenous compounds. The preparation of a quantitative assay system for the determination of molecular information on the metabolism, metabolism, and intracellular toxicity of a compound when administered to a cell is described in the literature. The calibration curves for each compound were prepared using internal standard materials such as 13C, 15N and stable isotope markers. Stable Isotope: Standard solution with a certain concentration is added, MRM is set up, and quantitative analysis lines are prepared when analyzing intracellular compounds. The results are as follows: quantitative analysis of compounds, correlation of concentrations and concentrations The settings of the mass analysis device are changed to improve the quantification of compounds. The problem of quantification of metabolites is that they are not easily quantified. Preparation of an assay system for the detection of toxicity associated with the administration of metabolites to cells

项目成果

Evaluation of Mitochondrial Function Based on the Direct Single- Cell Molecular Analysis by Mass Spectrometry

基于质谱直接单细胞分子分析的线粒体功能评估

• 发表时间: 2013
• 作者: Sachiko Date;Kiyoko Bando;Jiro Deguchi;Izuru Miyawaki;Juki Kimura;Hitoshi Funabashi;Tsutomu Masujima
• 通讯作者: Tsutomu Masujima

Single Cell Drug Discovery

单细胞药物发现

• 发表时间: 2014
• 作者: Sachiko Date;Hajime Mizuno;Tsuyoshi Esaki;Ai Fujita1;Tsutomu Masujima;Haruo Iwabuchi;Makoto Takei;Hideo Takakusa;Takashi Izumi;Setsuko Fujita;Shuichi Matsuda;Motohiko Morihara;Kiyoko Bando;Jiro Deguchi;Yasunori Fukuda;Naoki Tarui
• 通讯作者: Naoki Tarui