脳転移性腫瘍におけるGD1αの機能解明と治療への応用

GD1α在脑转移瘤中的功能阐明及其治疗应用

• 批准号: 25860235
• 负责人: 近藤 裕史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25860235/
• 关键词: 糖脂質; 転移; モノクローナル抗体; ノックアウトマウス; GD1α

細胞膜を構成する脂質には糖鎖が付加しており、腫瘍で著明に変化するので、腫瘍マーカーになり得る一方で、病態の分子基盤になる。我々は糖鎖合成系酵素遺伝子ノックアウト(KO)マウスを用いて、腫瘍関連糖鎖に対するモノクローナル抗体 (mAb) の効率的な作製を試み、バーキットリンパ腫特殊抗体の樹立と効果に関する報告を行った。この成果を踏まえ、腫瘍の脳転移のメカニズム解明に発展させるべく、抗転移関連糖鎖抗体の作製と糖鎖機能の解析を目指した。糖脂質GD1αは正常組織では中枢神経系に微量発現している。一方、腫瘍においては高転移性腫瘍に発現して血管内皮細胞との接着に寄与すること、GD1α合成酵素遺伝子の発現が乳癌の脳転移と強く関連することが報告された。そこで本研究計画では GD1αを欠損する遺伝子KOマウスにGD1αを免疫することでGD1αに対する特異的なmAb を作製し、GD1αの腫瘍細胞、特に転移における役割を明らかにすることを目指した。まず、GD1αを脳内に蓄積するGM3 合成酵素KOマウス脳からGD1αを精製した。次にGD1αを合成できないGM2/GD2 合成酵素KOマウスにリポソームに包埋したGD1αを免疫することで、GD1α特異的なmAbを産生するハイブリドーマ k122 (IgM) を単離した。薄層クロマトグラフィーimmunostaining 及びELISA により、k122 はGD1αに特異的に結合することを確認した。更に、GD1α前駆体であるGM1bの発現細胞に、GD1α合成酵素遺伝子を発現させることで、k122 の結合の増強が認められた。また力価抗体を含む腹水も作製した。これらの結果から、糖脂質に対するmAbの作製には糖鎖合成系酵素KO マウスが有益であることが明らかになった。今後これらの抗体を用いて、転移におけるGD1αの関与の解析を進める。

Cell membrane を constitute す る lipid に は sugar lock が plus し て お り, swollen sores で zhao Ming に variations change す る の で, swollen sores マ ー カ ー に な り る one party で, pathological の molecular base plate に な る. I 々 は sugar lock GeChengXi enzyme heritage 伝 son ノ ッ ク ア ウ ト (KO) マ ウ ス を with い て, swollen sores masato even sugar lock に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody (mAb) の な sharper rates for を try み, バ ー キ ッ ト リ ン パ swollen specific antibody の set と unseen fruit に masato す る report line を っ た. Tread こ の results を ま え, swollen sores の 脳 planning move の メ カ ニ ズ ム interpret に 発 exhibition さ せ る べ く, planning to move masato system と sugar sugar の lock antibody as a lock function analytical を の refers し た. Glycolipid GD1α で in normal tissues で in the central nervous system に is present in trace amounts, <s:1> て る る. Side, swollen sores に お い て は high planning move sex is swollen sores に 発 now し て endothelial cells と の に then send す る こ と GD1 alpha synthesis and enzyme heritage 伝 son の 発 が breast cancer now の 脳 strong planning move と く masato even す る こ と が report さ れ た. そ こ で this research project で は GD1 alpha を owe loss す る posthumous son 伝 KO マ ウ ス に GD1 alpha を immune す る こ と で GD1 alpha に す seaborne る specific な し the mAb を cropping, GD1 alpha の swollen sores cells, に planning move に お け る "を cut Ming ら か に す る こ と を refers し た. Youdaoplaceholder2 accumulates するGM3 synthesis enzyme in まず and GD1αを脳, KO を脳 ウス脳 ウス脳 らGD1αを refines た. Time に GD1 alpha を synthetic で き な い GM2 / KO GD2 synthetic enzyme マ ウ ス に リ ポ ソ ー ム に embedding し た GD1 alpha を immune す る こ と で, GD1 alpha specific な mAb を produce す る ハ イ ブ リ ド ー マ k122 (IgM) を 単 from し た. Thin layer ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー immunostaining and び ELISA に よ り, k122 は GD1 alpha に specific に combining す る こ と を confirm し た. More に, former GD1 alpha 駆 で あ る GM1b の に 発 now cells, but 伝 GD1 alpha synthetic enzyme を 発 now さ せ る こ と で, k122 の combining の raised strong が recognize め ら れ た. Youdaoplaceholder0 force 価 antibody を containing む ascites また preparation た. こ れ ら の results か ら, sugar, lipid に す seaborne る mAb の cropping に は sugar lock GeChengXi enzyme KO マ ウ ス が beneficial で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. In the future, the <s:1> れら <s:1> antibody を will be used by て て and 転 transfer におけるGD1α <s:1> relation and <s:1> desorpation を into める.

项目成果

Establishment of anti-GD1α mAbs and expression analysis of asialo-series gangliosides in human cancer cell lines

抗GD1α单克隆抗体的建立及去唾液酸系列神经节苷脂在人癌细胞系中的表达分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 川口 実太郎;伴 浩志;佐伯 晃一;Robiul Bhuiyan
• 通讯作者: Robiul Bhuiyan