非小細胞肺癌を標的とするNrf2阻害剤の開発

开发针对非小细胞肺癌的Nrf2抑制剂

• 批准号: 25860634
• 负责人: 光石 陽一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25860634/
• 关键词: 非小細胞肺癌; Nrf2; 創薬スクリーニング; Keap1

Nrf2阻害剤のスクリーニング系の確立するために、Nrf2の抑制因子であるKeap1欠損マウス線維芽細胞(Keap1 KO MEF)を用いた検出系を構築しようと試みた。Keap1欠損によりNrf2 が蓄積する状態を非小細胞肺癌におけるNrf2の過剰蓄積のモデル系と見立てて、Keap1 KO MEFにおけるNrf2機能抑制効果を検出する。既にNrf2の主要標的遺伝子の1つであるヘムオキシゲナーゼ(HO-1)遺伝子座にGFPをノックインしたマウス(HO-1EGFP/+マウス)を用いて、HO-1EGFP/+マウスとKeap1 KOマウスとの交配により、Keap1-/-::HO-1EGFP/+マウスを得てそのMEFを樹立した。同細胞においては、恒常的に安定化したNrf2によりHO-1遺伝子座のEGFPが恒常的に発現する。しかしNrf2のsiRNAを導入した際のEGFP蛍光強度の減少がはっきりと確認できなかった。この原因として、Keap1 KO MEFには既にNrf2が過剰に蓄積しており、EGFPの蛍光強度が強すぎて、一過性のsiRNA導入ではEGFPが分解できなかった可能性がある。このスクリーニング系では、ハイスループットスクリーニングに利用することは困難と考えられた。現在、Keap1 KO MEFを用いて、アデノシン三リン酸(ATP)量をホタル・ルシフェラーゼ発光法で測ることで生細胞数をモニターすることで、直接ハイスループットスクリーニングに使用できるか検討を始めた段階である。

Nrf2 resistance against tonic の ス ク リ ー ニ ン グ is の establish す る た め に, Nrf2 の inhibitory factor で あ る Keap1 owe loss マ ウ ス line d bud cells (Keap1 KO MEF) を い た を 検 out department building し よ う と try み た. Keap1 owe loss に よ り Nrf2 が accumulation す る state を non-small cell lung cancer に お け る Nrf2 の before turning to accumulate の モ デ fasten ル と see stand て て, Keap1 KO MEF に お け る Nrf2 function inhibition of unseen fruit を 検 out す る. Both に Nrf2 の main mark heritage 伝 son の 1 つ で あ る ヘ ム オ キ シ ゲ ナ ー ゼ (HO - 1) heritage 伝 stroma に GFP を ノ ッ ク イ ン し た マ ウ ス (egfp/HO - 1 + マ ウ ス) を with い て egfp, HO - 1 / + マ ウ ス と Keap1 KO マ ウ ス と の mating に よ り, Keap1 - / - : : HO - 1 / egfp + マ ウ ス を have て そ の MEF を set し た. With cell に お い て は, constant に stabilization し た Nrf2 に よ り HO - 1 heritage 伝 stroma の EGFP が constant に 発 now す る. し か し Nrf2 の siRNA を import し た interstate の EGFP 蛍 light intensity の reduce が は っ き り と confirm で き な か っ た. こ の reason と し て, Keap1 KO MEF に は both に Nrf2 が through turning に accumulation し て お り, EGFP の 蛍 light intensity strong が す ぎ て, transient の siRNA import で は EGFP が decomposition で き な か っ た possibility が あ る. こ の ス ク リ ー ニ ン グ department で は, ハ イ ス ル ー プ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ に using す る こ と は difficult と exam え ら れ た. Now, Keap1 KO MEF を with い て, ア デ ノ シ ン three リ ン acid (ATP) quantity を ホ タ ル · ル シ フ ェ ラ ー ゼ 発 で light method measuring る こ と で living cells number を モ ニ タ ー す る こ と で, direct ハ イ ス ル ー プ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ に use で き る か 検 for beginning を め た Duan Jie で あ る.

项目成果

Annual Review 呼吸器 2014

2014 年呼吸科年度回顾

• 发表时间: 2014
• 作者: 永井厚志;光石陽一郎
• 通讯作者: 光石陽一郎

Annual Review 呼吸器 2015

2015 年呼吸科年度回顾

• 发表时间: 2015
• 作者: 永井厚志;光石陽一郎;本橋ほづみ
• 通讯作者: 本橋ほづみ