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造血幹細胞の対称・非対称性自己複製に関与する分子の探索

寻找参与造血干细胞对称和不对称自我更新的分子

基本信息

批准号：
25860784
负责人：
山本玲
金额：
$ 2.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25860784/
关键词：
造血幹細胞自己複製対称性分裂非対称性分裂

项目摘要

白血球・赤血球・血小板を蛍光蛋白(Kusabira-orange)でマークしたマウスを用い、造血幹細胞画分(CD150+CD41-CD34-c-Kit+Sca-1+Lineage- cells)の単一細胞移植、さらに半年経過観察後そのレシピエント骨髄を用い連続骨髄移植を行った。その連続移植の際に、造血幹細胞画分をフローサイトメトリーにより採取し、RNAを採取し網羅的遺伝子発現解析を行った。この連続移植・遺伝子解析を繰り返すことにより、造血幹細胞の長期骨髄再構築能に関与する遺伝子を見つけることができると期待でき、実際、その中には、老化、細胞周期などに関与すると考えられている遺伝子が多数、濃縮されていた。さらに遺伝子候補を絞るために、別の連続移植マウスを用い同様の解析を行い、候補遺伝子のメカニズム解析を行う予定である。また、1個の細胞を分取培養し36-42時間後にその細胞が１回分裂した後、2個の娘細胞をmicromanipulatorにより、１個ずつに分けるという、paired-daughter cellアッセイにより連続移植実験を行った。前述の系と同様に遺伝子発現解析の比較を行った。この比較により複数の遺伝子が自己複製に関与する候補として抽出されてきており、さらなる候補の絞り込み・解析を予定している。本研究により、造血幹細胞の長期骨髄再建・自己複製に関与する遺伝子を同定することができれば、人の骨髄移植の治療成績の向上などが期待される。

White blood cells, red blood cells, platelets and light protein (Kusabira-orange) are used in the study. Hematopoietic stem cells (CD150 + CD41-CD34-c-Kit+Sca-1+Lineage- cells) are used in single cell transplantation. The analysis of hematopoietic stem cell development during transplantation is carried out by using RNA and DNA. The results of this study indicate that hematopoietic stem cell transplantation and genetic analysis are related to long-term bone remodeling. For example, if a candidate is selected, the candidate is selected. After 36-42 hours of culture, 1 cell divided into 1 cycle, 2 cells divided into micromanipulator, 1 cycle, paired-daughter cell divided into 2 cycles, and then transplanted. The analysis of the occurrence of the same gene in the above-mentioned system is compared. This comparison is based on the determination of the candidate for each copy. This study is aimed at establishing the relationship between long-term bone regeneration and self-replication of hematopoietic stem cells and gene transfer, and improving the therapeutic performance of human bone transplantation.