精巣特異的遺伝子movo遺伝子の精子形成に関する研究

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Cre-loxPシステムを用いた精母細胞特異的movo遺伝子欠損モデルの作製まず、われわれがこれまでに作製したmovo遺伝子にloxP配列を導入したマウスを精原細胞で特異的に発現するStra8-Creマウスと交配させ、Movo蛋白の発現を確認したがコンディショナルノックアウトマウスにならなかった。これはStra8の発現時に十分なCreの発現が認められなかった為と考えられる。そこで、GFP-Cre配列を持ったレンチウイルスを精巣に直接トランスフェクションする事でCreの発現を誘導しようと試みたが、精巣組織の免疫染色切片でGFPの蛍光は確認出来なかった。Germ lineへのCre導入を試みるべく、次にプラスミドベクターを用いたin vivoでのElectroporationを試みた。pCAG-nlsCRE-IRES2-EGFPプラスミドを作製。Capillary syringeを精巣網へ穿刺、精細管内に逆行性にプラスミドを注入した後、ピンセット型円形電極を用いてelectroporationしプラスミドをトランスフェクションした。今後、トランスフェクション後の精巣組織切片を用いて、movoを欠損した精巣組織での精子形成における表現型の確認、既に作製したOvol2/MOVO に特異的な抗体、Germ lineの各時期特異的抗体や他のXY body特異的抗体との共染色によりMovo蛋白の機能解析を試みる予定である。同時に、自然科学研究機構・基礎生物学研究所生殖細胞研究部門・教授・吉田松生先生の御厚意により精巣幹細胞に発現するNGN3-Creマウスを提供頂いた。NGN3-Creマウスとmovo遺伝子にloxP配列を導入したマウスを交配させることで再度コンディショナルノックアウトマウスを作製しMovoの機能解析を行う予定である。