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Sub-MIC アジスロマイシンの抗バイオフィルム作用のメカニズムに関する検索

Sub-MIC 探索阿奇霉素抗生物膜作用机制

基本信息

批准号：
25861796
负责人：
前薗葉月
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

嫌気性インキュベーター内で独自に改良を加えたmodified Robbins　device (MRD) を用い，MRD中に唾液処理を行ったハイドロキシアパタイト (HA) ディスクを填入し，HAディスク上にバイオフィルムを作製した。すなわち，嫌気性インキュベーター内でペリスタポンプにて線毛の遺伝子型が異なる P. gingivalis 381 (Ⅰ型) , HW24D1 (Ⅱ型) , 6/26 (Ⅲ型) ，W83 (Ⅳ型) の培養液を各々37℃，流速3.3ml/分で14日間灌流し，HAディスク上にバイオフィルムを作製した。菌液の交換は2日毎に行い，作製されたバイオフィルムにsub-MICのAZMを添加し，さらに一週間灌流した。その後，HAディスクを回収し，菌体よりタンパクを精製した。精製したタンパクのうち，二次元電気泳動システムを用いてタンパクを分離後，sub-MIC の AZM 添加群と非添加群でタンパクの発現量に差を認めたタンパクについて検討したところ，381株，HW24D1株およびW83株において，浮遊細菌とバイオフィルム遊離細胞の50および110kDa付近のタンパク発現量に差が認められた。これらのタンパクについて、さらに質量分析を行いタンパクの同定を行ったところ、50kDa 付近のタンパクについてはヘマグルチニンタンパクの HagE およびグルタミン酸脱水素酵素であり，110kDa 付近のタンパクは P. gingivalis の膜関連タンパクである RagA であることが判明した。これらの結果より，sub-MIC AZM の抗バイオフィルム作用には，RagA，HagE およびグルタミン酸脱水素酵素といったタンパクが関与していることが明らかとなった。

The modified Robbins device (MRD) is used in MRD, and the saliva processing in MRD is filled in and controlled by HA. P. genivalis 381 (type I) , HW24D1 (type II) , 6/26 (type III), W83 (type IV) were cultured at 37℃, flow rate 3.3ml/min, 14 days perfusion, HA was prepared. The bacterial solution was exchanged every 2 days, and the sub-MIC and AZM were added every week. After that, the HA will be refined. After purification and separation, the difference between sub-MIC AZM added group and non-added group was identified. 381 strains, HW 24D1 strain and W83 strain were identified. The difference between 50 kDa and 110kDa free cells was identified. For example, the 50kDa protein was used to determine the activity of acid dehydratase, and the 110kDa protein was used to determine the activity of P. genivalis membrane-related enzyme. Sub-MIC AZM is resistant to the action of RagA, HagE, and RagA.