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DNA二重鎖切断修復と塩基除去修復の相互作用とその修復分子機構の解明

阐明DNA双链断裂修复与碱基切除修复之间的相互作用及其修复的分子机制

基本信息

批准号：
25871149
负责人：
正岡綾
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25871149/
关键词：
DNA修復放射線 DNA二重鎖切断塩基損傷

项目摘要

昨年度に引き続き、今年度もDNA二重鎖切断修復の主要な経路であるHRおよびNHEJの細胞内寄与の検討を行った。GFPをレポーター遺伝子として用い、HRおよびNHEJを特異的に検出するプラスミドの、効果的ながん細胞トランスフェクション条件を決定した。同条件を用いたトランスフェクションにより、HRおよびNHEJ検出用プラスミド遺伝子をステイブルに発現するがん細胞株の樹立を試みた。X 線および重粒子線を照射したがん細胞における塩基除去修復経路の関与について、本年度は塩基除去修復に関連するタンパク質の発現量変化に着目して検討を行った。がん細胞をそれぞれの放射線で照射した後、修復時間ごとにタンパク質抽出を行い、ウェスタンブロッティングを行った。その結果、検討したタンパク質間では放射線照射による顕著な差は認められなかった。また、修復時間による発現量変化影響も認められなかった。しかし、DNA二重鎖切断修復タンパク質の阻害剤を用いて放射線照射を行ったところ、放射線照射前後で、わずかではあるが一部の塩基除去修復に関与するタンパク質発現の減少が認められた。そのため、RT-PCR実験をセットアップした。重粒子線照射については、昨年行った炭素線に加え鉄線の影響についても検討を行った。その結果、塩基除去修復欠損の影響は炭素線のほうが鉄線よりも大きいことが明らかとなった。

The main pathway of DNA double lock repair was discussed in the intracellular pathway of HR and NHEJ in 2005 and 2006. The use of GFP as a carrier gene, HR and NHEJ as a specific detection tool, and the conditions for effective cell growth are determined. Under the same conditions, the cell lines were established using the same method. X-ray and heavy particle irradiation have been carried out to investigate the relationship between radical removal and repair, and the relationship between radical removal and repair and the occurrence of qualitative changes this year. The cells were irradiated with radiation, and the repair time was determined. The results of the investigation were as follows: The time to repair and the time to measure the impact of changes are recognized. DNA double-lock cleavage repair is performed by radiation irradiation, and a part of DNA double-lock cleavage repair is performed before and after radiation irradiation.そのため、RT-PCR実験をセットアップした。Heavy particle ray irradiation, carbon ray irradiation and iron ray irradiation. As a result, the base is removed from the effect of repair damage. The carbon line is removed from the iron line.