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iPS細胞由来造血幹細胞を用いた動物細胞非依存的な小児血液腫瘍疾患の治療法の開発

利用iPS细胞衍生的造血干细胞开发不依赖于动物细胞的儿童血液肿瘤疾病治疗方法

基本信息

批准号：
26293243
负责人：
海老原康博
金额：
$ 7.65万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-26293243/
关键词：
小児血液学

项目摘要

iPS細胞の臨床応用において動物細胞非依存的な培養系の構築はとても重要である。具体的にはフィーダー細胞として使用しているMEFの代わりにiPS細胞由来の間葉系幹細胞を用いて培養することを検討した。platelet lysate(PL)は間葉系幹細胞培養においてFBS(fetal bovine serum)の代わりに用いられるため、健常人由来のiPS細胞を５％PLを含む培養液にて培養することで、６－８週間で充分に増殖した付着細胞を回収できた。この付着細胞を解析すると、表面抗原は骨髄やES細胞由来の間葉系幹細胞と同様であった。また、この付着細胞を間葉系細胞に分化させると、脂肪細胞、骨芽細胞や軟骨細胞に分化することが確認された。このため、この付着細胞はMSCであることが確認された。また、brachuryやMSX1の発現を認めたことから、中胚葉由来であることが確認された。次に、このiPS細胞由来のMSCとiPS細胞を共培養させると、iPS細胞は４週にわたり未分化性を維持することができた。このため、iPS細胞由来の間葉系幹細胞はMEFの代わりに使用できる可能性があると考えられた。その後、iPS細胞由来のMSCとiPS細胞との共培養において、無血清血液細胞誘導培地を用いて血液細胞への分化誘導を試みたところ、共培養１０－１４日目にcobblestone領域の出現を認めた。この細胞を回収すると、CD34陽性細胞が約10％認められ、血液細胞コロニーアッセイを施行すると様々な血液細胞コロニーが出現し、種々の血液細胞への分化誘導が確認された。この方法により、ヒトiPS細胞から動物細胞、動物血清非依存的に分化誘導された多能性造血幹細胞の産生が認められた。

The construction of animal cell-independent culture systems is important for clinical use of iPS cells. Specifically, we will discuss the use of MEF for generation of fibroblast cells and the use of mesenchymal stem cells derived from iPS cells for culture. Platelet lysate(PL) is used to culture mesenchymal stem cells in FBS(fetal bovine serum) medium, iPS cells derived from healthy individuals in medium containing 5% PL, and the cells are fully cultured in 6-8 weeks. The surface antigen of the stem cells is the same as that of mesenchymal stem cells from which ES cells originate. The differentiation of mesenchymal cells, adipocytes, osteoblasts and chondrocytes was confirmed.このため、この付着细胞はMSCであることが确认された。The origin of mesoderm is confirmed. The origin of iPS cells and the co-culture of iPS cells are discussed below. The origin of iPS cells and mesenchymal stem cells are the possibility of MEF generation. After that, iPS cell origin MSC and iPS cell co-culture, serum-free blood cell induction culture, blood cell differentiation induction test, co-culture 10-14 days, cobblestone field appearance About 10% of the CD34-positive cells were identified, and the induction of differentiation of blood cells was confirmed. The method includes the induction of pluripotent hematopoietic stem cells from animal cells and serum-independent differentiation.