サイトカイン受容体の解析とそのヒト造血幹細胞の純化、増幅法への応用

细胞因子受体分析及其在人造血干细胞纯化扩增中的应用

• 批准号: 11770400
• 负责人: 海老原 康博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770400/
• 关键词: Flt3; CD34; 造血幹細胞; NOD; SCIDマウス; 臍帯血; G-CSF受容体; 骨髄球系前駆細胞

受容体型チロシンキナーゼファミリーに属しているflt3とそのLigand(FL)が最近同定され、その造血系に対する作用が注目されている。本研究では、Flt3のヒト臍帯血CD34陽性細胞における発現を解析し、Flk2陽性、陰性細胞を各々FACSソーティングし造血能を比較検討した。CD34陽性細胞の81.3±8.0%にFlt3の発現が認められ、CD34+CD33+細胞の85.2±4.0%、CD34+CD33-細胞の75.3±4.2%、CD34+CD38+細胞の77.4±4.5%、CD34+CD38-細胞の80.4±4.8%に認められた。コロニーアッセイからは、大部分の骨髄球系前駆細胞はFlt3を発現しているが、赤血球系前駆細胞や多能性造血前駆細胞にはFlt3発現細胞と非発現細胞が存在することが示された。しかし、CD34+Flt3+細胞から形成された混合コロニーは、CD34+Flt3-細胞由来のものと比較して大型のコロニーが多数認められたことより、より未分化な多能性造血前駆細胞はFlk2を発現している可能性が示唆された。次に、CD34+Flt3+細胞、CD34+Flt3-細胞をそれぞれ10000個ずつNOD/SCIDマウスに移植すると、CD34+Flt3+細胞からのみリンパ球、骨髄球、種々の造血前駆細胞を含む造血再構築能が認めれた。より未分化なlin-CD34+CD38-細胞中のFlt3陽性細胞を単一細胞に分離し、SCF+FL+TPO+IL-6+可溶性IL-6受容体存在下で1-2週間液体培養した後、増殖が認められたクローンについて、NOD/SCIDマウスに移植して造血再構築能を検討すると、16匹のNOD/SCIDマウスのうち6匹37.5%でヒト造血再構築が確認された。以上の結果より、ヒト造血再構築能を有する造血幹細胞はFlt3を発現していることが示された。

The role of the receptor in the development of the hematopoietic system is noteworthy. In this study, we analyzed the development of CD34-positive cells in human umbilical cord blood and compared the development of FACS and hematopoietic function of Flk2-positive and Flk2-negative cells. CD34 + CD33 + cells accounted for 85.2±4.0%, CD34 + CD33-cells for 75.3±4.2%, CD34 + CD38 + cells for 77.4±4.5%, and CD34 + CD38-cells for 80.4±4.8%. Most of the osteoblast precursor cells are Flt3-producing cells, while the erythroid precursor cells and pluripotent hematopoietic precursor cells are Flt3-producing cells. CD34 + Flt3 + cells were found to be mixed with CD34 + Flt3-cells, and most of them were identified as undifferentiated pluripotent hematopoietic progenitor cells. CD34 + Flt3 + cells, CD34 + Flt3-cells, CD34 + Flt3 + cells, Flt3-positive cells from undifferentiated lin-CD34 + CD38-cells were isolated as a single cell, cultured in liquid medium for 1-2 weeks in the presence of SCF+FL+TPO+IL-6+ soluble IL-6 receptor, and then cultured in NOD/SCID medium. Hematopoietic reconstruction was evaluated in 16 NOD/SCID medium. The above results show that hematopoietic stem cells can be reconstructed by Flt3.

项目成果

Sui X: "Soluble IL-6 receptor with IL-6 stimulates megakaryopoiesis from human CD34^+ cells through gp130 signaling"Blood. 93. 2525-2532 (1999)

Sui X：“可溶性 IL-6 受体与 IL-6 通过 gp130 信号传导刺激人类 CD34^ 细胞的巨核细胞生成”血液。

Ueda T: "Hematopoietic repopulating ability of cord blood CD34(+)cells in NOD/Shi-scid mice"Stem Cells. 18. 204-213 (2000)

Ueda T：“NOD/Shi-scid 小鼠脐带血 CD34(+) 细胞的造血再生能力”干细胞。

Ishii T: "Expression of SDF-1/PBSF reseptor CXCR4 on CD34^+ human bone marrow cells in a phenotypic alteration for commited lymphoid progenitors"J Immunol. 163. 3612-3620 (1999)

Ishii T：“SDF-1/PBSF 受体 CXCR4 在 CD34+ 人骨髓细胞上的表达，导致定型淋巴祖细胞的表型改变”JImmunol。

Ebihara Y.: "Exclusive expression of G-CSF receptor on myeloid progenitors in bone marrow CD34^+ cells."Br.J.Haematol.. 109. 153-161 (2000)

Ebihara Y.：“骨髓 CD34^ 细胞中骨髓祖细胞上 G-CSF 受体的独家表达。”Br.J.Haematol.. 109. 153-161 (2000)

Matsuoka S.: "CD34 expression on long-term repopulation hematopoietic stem cells changes during developmental stages."Blood. 97. 419-425 (2001)

Matsuoka S.：“长期再增殖造血干细胞的 CD34 表达在发育阶段发生变化。”血液。