腎臓の初期発生における新規重要遺伝子の探索とその機能解析

寻找早期肾脏发育中新的重要基因及其功能分析

• 批准号: 07J10181
• 负责人: 高里 実
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J10181/
• 关键词: 腎臓; TRB2; ノックアウトマウス; 糸球体

腎臓において、糸球体上皮細胞(podocyte)特異的に発現している遺伝子TRB2に注目した。Notch遺伝子は糸球体発生に必須な遺伝子であるが、in vitroの実験によって、その下流遺伝子としてTRB2が報告されている。そこで、TRB2のノックアウトマウスを作製することにした。TRB2のノックアウトは、TRB2の遺伝子座にLacZ遺伝子をノックインする方法で行った。TRB2のマウス全身での発現パターンを解析するために、作製したTRB2-LacZヘテロマウス(wt/lacZ)の胎児をLacZ染色したところ、TRB2は腎糸球体の他、中腎、精巣、血管内皮、心筋、骨細胞、網膜細胞、後根神経節、に発現していることがわかった。この発現パターンはNotch遺伝子の発現パターンと非常に重なっており、Notch遺伝子の下流であることがin vivoでも示唆された。次に、両親がヘテロの場合のノックアウト(-/-)の子供の割合(生存率)を調べた。その結果、57匹中16匹(約28%)がノックアウトマウスであることを確認した。これはメンデルの法則に従っており、胎生致死の表現型がないことを意味する。次に、ノックアウトマウスの発生期の腎臓を組織切片により観察したところ、糸球体の存在を確認した。また、生後4週齢のノックアウトマウスの尿を検査したが、野生型と比較して差は見られなかったことから、腎機能に顕著な差は無いことが分かった。次に、TRB2の発現している中腎、精巣、血管内皮、心筋、骨細胞、網膜細胞、後根神経節に関して、ノックアウトマウスでその形成に異常があるかを観察したところ、形成に関しては明らかな異常は観察されなかった。TRB遺伝子のファミリーはTRB2の他にTRB1と3が存在するが、TRB1は腎臓に弱く発現していることが分かった。TRB2のノックアウトマウスにおいて、TRB1が糸球体の形成にリダンダントに機能している可能性もあることが示唆された。TRB2ノックアウトマウスでは腎臓発生・糸球体形成の異常は認められなかったが、これはTRB2が糸球体形成に影響を与えない、純粋なマーカー遺伝子として使える可能性を示唆するものであった。

Renal にお にお て, podocyt-specific に occurrence, <s:1> て る る progeny, 伝 TRB2に, pay attention to た. Notch heritage 伝 は si son born sphere 発 に must な posthumous son 伝 で あ る が, the in vitro の be 験 に よ っ て, そ の dirty legacy 伝 son と し て TRB2 が report さ れ て い る. Youdaoplaceholder0 で で, TRB2 ノッ ノッ アウト アウト ウスを ウスを ウスを are used to make する とに とに た た た た た. TRB2 の ノ ッ ク ア ウ ト は, TRB2 の heritage 伝 stroma に LacZ posthumous son 伝 を ノ ッ ク イ ン す る line method で っ た. TRB2 の マ ウ ス systemic で の 発 now パ タ ー ン を parsing す る た め に, cropping し た TRB2 - LacZ ヘ テ ロ マ ウ ス (wt/LacZ) の tire where を LacZ staining し た と こ ろ, TRB2 は renal si sphere の him, in the kidney, the essence of 巣, endothelial, heart muscle, bone cells, retinal cells, after god 経 section, に 発 now し て い る こ Youdaoplaceholder0 った. こ の 発 now パ タ ー ン は Notch posthumous son 伝 の 発 now パ タ ー ン と very heavy に な っ て お り, Notch but 伝 の obscene で あ る こ と が in vivo で も in stopping さ れ た. On the occasion of に and がヘテロ of the two relatives, <s:1> ノッ アウト(-/-) swab for swab cleft (survival rate)を adjustment べた. Youdaoplaceholder0 results, 16 out of 57 (about 28%)がノッ アウト アウト ウスである ウスである とを とを confirmed た た. The <s:1> れ メ メ デ デ デ the に従ってお law of <s:1>, the vivial-to-death <s:1> phenotype がな とを とを とを とを means する. に, ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の 発 stage perforatien を の kidney biopsy に よ り 観 examine し た と こ ろ, si sphere の を confirm し た. ま た, 4 weeks after birth 齢 の ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の urine を 検 check し た が, wild type と compare し て poor は see ら れ な か っ た こ と か ら, renal function に 顕 the poor な は no い こ と が points か っ た. に, TRB2 の 発 now し て い る in kidney, fine 巣, endothelial, heart muscle, bone cells, retinal cells, root after god 経 に masato し て, ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス で そ の forming abnormal に が あ る か を 観 examine し た と こ ろ, forming に masato し て は Ming ら か な abnormal は 観 examine さ れ な か っ た. TRB posthumous son 伝 の フ ァ ミ リ ー は TRB2 の he に TRB1 と 3 が exist す る が, TRB1 は renal viscera に weak く 発 now し て い る こ と が points か っ た. TRB2 の ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス に お い て, TRB1 が si の sphere formation に リ ダ ン ダ ン ト に function し て い る possibility も あ る こ と が in stopping さ れ た. TRB2 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス で は renal viscera 発 raw · si sphere forming abnormal の は recognize め ら れ な か っ た が, こ れ は TRB2 が si sphere formation に influence を and え な い, pure 粋 な マ ー カ ー posthumous son 伝 と し て make え を る possibility in stopping す る も の で あ っ た.