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魚類イリドウイルス病ワクチンの改良と免疫成立判定法の確立

鱼类虹彩病毒病疫苗的改进及免疫测定方法的建立

基本信息

批准号：
08F08107
负责人：
吉水守
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08107/
关键词：
マダイイリドウイルスワクチン免疫成立判定

项目摘要

1)ホルマリン不活化RSIV培養液接種ブリの血清を用い、ELISA法による抗RSIV抗体の検出法を検討した。RSIV培養液を蒸留水で10倍に希釈し、37℃で16時間乾燥させるとRSIV抗原をELISAプレートに効率的に固定できた。RSIVワクチンに含まれるFBSに対する抗体が誘導され、抗体検出ELISAの精度が著しく低下するが、ブリ血清に終濃度でFBSおよびスキムミルクを各々50%および5%(w/v)となるよう添加し、25℃で1時間処理すると血清中の抗BSA抗体が完全に吸収され、抗RSIV抗体のみを特異的に検出できた。2)MCPとArPase遺伝子に基づいた系統解析の結果、RBIVおよびRSIVを含むゲノグループI、ISKNVを含むゲノグループII、FLIV、TBIVおよびターボット分離株を含むゲノグループIIIに分類され、日本で分離したRSIVは何れもゲノグループIに分類にされた。3)培養RSIV液を用いた病原性試験で、RSIVの50%致死量(LD_<50>)は約0.1 TCID_<50>/fishと算出され、RSIVの感染価、細胞の肥大化および病原性の関係が矛盾することが示された。これはRSIV以外のウイルスが本病に関与している可能性を示唆する結果となった。RSIVの感染価および病原性に対するTrXの影響を検討した結果、細胞培養系(in vitro)ではTrX処理によりRSIVの感染性が消失したが、病原性実験結果(in vivo)ではTrX処理により失われた病原性は極僅かであった。また、TrX処理RSIV験区の死亡魚の臓器からRSIVが再分離さ、RSIV以外のウイルスが本病あるいはRSIVの増殖に関わっているという仮説を裏付けると考える。肥大化したRSIV感染GF細胞を電子顕微鏡で観察した結果、直径160nmと60nmのサイズ異なるウイルス粒子の存在が認められた。60nmのウイルスをMegalocyti-関連ウイルス(McAV)とした。以上、本研究により、マダイイリドウイルス病にはRSIVの他に、RSIVの病原性、増殖およびCPE生産に関わるMcAVが存在する可能性が示唆され、本ウイルスをワクチン抗原に加える必要があることが明らかとなった。

The main results were as follows: 1) the inactivated RSIV culture solution was used to inoculate the serum, and the ELISA method was used to detect the anti-RSIV antibody. RSIV culture solution was used to steam and retain water for 10 times and dried at 37 ℃ for 16 hours to determine the rate of ELISA antigens. RSIV Elisa contains anti-BSA antibodies in serum samples of 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5%, 5 2) the results of the basic system analysis of MCP ArPase, RBIV RSIV, ISKNV, FLIV, TBIV, III, Japan, Japan and Japan. 3) the RSIV solution was used to calculate the pathogenicity, RSIV infection and cellular hypertrophy by using RSIV 50% lethal dose (LD_<50>) of about 0.1 TCID_<50>/fish. In addition to the RSIV, please check the possibility of the disease and the possibility of the disease and the results of the disease. The results of RSIV infection showed that the pathogeny was TrX, the pathogeny was TrX, the RSIV infection disappeared, the pathogeny was TrX, the pathogenicity was not clear, only the pathogeny was lost. The disease is caused by the death of the RSIV, the death of the RSIV, the separation of the RSIV, the disease outside the RSIV, the colonization of the RSIV, the disease, the death, the separation, the diagnosis, the diagnosis and treatment. The results of cell electron microscopical analysis of GF infected with hypertrophic RSIV showed that the diameter of 160nm was 60 nm, and there was a DNA fragment in the particles. 60nm has been called megalocyti. (McAV) has been broken. In this study, there is a possibility that there is a possibility of RSIV infection, RSIV pathogenicity, the possibility of McAV infection, the presence of antigens and the addition of necessary drugs.