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細胞表層提示技術を用いたコリネ菌によるバイオナイロン生産プロセスの開発

利用细胞表面显示技术开发棒状杆菌生物尼龙生产工艺

基本信息

批准号：
08J00859
负责人：
舘野俊博
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J00859/
关键词：
Corynebacterium glutamicum Porin

项目摘要

本研究では、バイオリファイナリー実現に向け、Corynebacterium glutamicum(コリネ菌)における細胞表層提示技術の開発及びそれを用いたバイオナイロン生産プロセスの開発を行った。まず、コリネ菌が有する細胞表層に局在するタンパク質をアンカータンパク質とした、コリネ菌における新規細胞表層提示技術の開発を行った。細胞壁に局在する種々のPorin(PorB,PorC,PorH)をアンカータンパク質として用い、Streptococcus bovis 148株由来のα-アミラーゼ(AmyA)をPorinのC末端に融合させ、免疫抗体染色によるAmyA表層発現の確認を行った。その結果、AmyAの細胞表層への局在が確認された。また、Porinを用いてAmyAを細胞表層に提示した菌体を培養し、その培養上清及び菌体を用いてそれぞれのAmyA活性の測定を行った。その結果、AmyA活性は上清からは検出されず、菌体からのみAmyA活性が検出された。これらのことから、PorB,PorC,PorHをアンカータンパク質として用いることで、目的タンパク質を強固に細胞表層に固定化することが可能なコリネ菌における新規細胞表層提示技術の開発に成功した。この技術は、セルラーゼといったセルロース糖化酵素の固定化など、コリネ菌を用いたバイオ変換プロセスにおいて非常に有用なツールとして期待される。次に、コリネ菌を用いたナイロンの原料として利用可能なγ-アミノ酪酸(GABA)の生産を目指した。Lactobacillus brevis IFO12005からグルタミン酸をGABAに変換するグルタミン酸脱炭酸酵素(GadB)のクローニングを行った。今後、このgadB遺伝子をグルタミン酸発酵菌であるコリネ菌に導入することで効率的なGABA生産が期待される。

In this study, the Corynebacterium glutamicum (pathogenic bacteria) cell table indicates that the technology will be open and the health care providers will be able to start the business. There is a list of bacteria, bacteria, bacteria and bacteria. The cell wall test showed that the fusion of Porin C-terminus of AmyA (AmyA) was confirmed by immuno-antibody staining and the AmyA table was confirmed by immunostaining. The results show that the AmyA cell table is confirming the error. The supernatant of cell culture, the supernatant of cell culture and the activity of AmyA were determined by using the cell table of Porin and Porin. The results showed that the AmyA activity was detected in the supernatant and the AmyA activity was detected in the bacteria. In order to strengthen the immobilization of the cell table, it is possible that the new cell table has been successfully opened. The results show that it is possible for the technology to start successfully. The technology is very useful, the saccharifying enzyme is immobilized, the bacteria are immobilized, and the bacteria are very useful. Secondary and secondary bacteria are used as raw materials to make use of possible gamma-ray butyric acid (GABA) to produce raw materials. Lactobacillus brevis IFO12005, GABA, decarbonizing acid enzyme (GadB), acid decarbonizing enzyme, decarbonizing enzyme, decarbonizing enzyme, In the future, the rate of gadB infection is expected to increase with the increase in the rate of GABA infection.