常磁性プローブを用いたNMRによる高分子量蛋白質およびその複合体の構造生物学

使用顺磁探针通过 NMR 分析高分子量蛋白质及其复合物的结构生物学

• 批准号: 08J01000
• 负责人: 齋尾 智英
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J01000/
• 关键词: 常磁性ランタニド; NMR; ランタニド結合タグ; FBDD; リガンドスクリーニング; 複合体構造決定; 薬剤設計; Paramagnetic NMR; 常磁性ランタノイド; タンパク質立体構造; ランタノド結合タグ; オートファジー; ホモダイマー; ZIP; p62; ランタノイド結合タグ

常磁性ランタニドイオンをタンパク質に固定することで、PCS (pseudo-contact shift)やPRE (paramagnetic relaxation enhancement)といった常磁性効果が観測され、タンパク質のNMR立体構造解析を行う上で有用な情報が得られる。しかし金属イオンを結合しない一般のタンパク質に対してランタニドプローブを応用するためには、ランタニドをタンパク質に対して強固に固定できるランタニド結合タグを用いる必要がある。H20年度にはタンパク質に対するタグの運動性を最小限に抑えたランタニド結合タグを開発した。H21年度にはそのタグシステムを実際のタンパク質複合体構造解析へと応用し、手法の有効性を実証した。今年度はランタニドプローブ法をさらに発展させ、NMRを用いたリガンドスクリーニング手法の開発を行った。FBDD (Fragment Based Drug Discovery)などの薬剤探索戦略においては、標的タンパク質に対して特異的に結合するリガンドを迅速に同定し、さらにリガンド-標的タンパク質の複合体構造情報を取得することが重要である。本研究ではランタニドタグを用いてランタニドイオンを標的タンパク質に固定することで、PREに基づいて標的タンパク質と結合したリガンドを混合溶液中から同定し、さらにPCSの解析によってリガンド-タンパク質複合体の立体構造を迅速に決定する手法を開発した。

The permanent magnetic properties are fixed, the PCS (pseudo-contact shift), PRE (paramagnetic relaxation enhancement), and the magnetic properties are fixed. The results show that the magnetic properties of the products are very good. In general, the metal was used. The metal was used in general. In general, the necessary equipment was used in the system. In H20, there is a minimum limit for the prevention of sexual activity in the year H20 combined with the combination of training and training. In the year H21, we need to make a comprehensive analysis of how to use it and how to use it. This year, the annual exhibition and the NMR exhibition have been conducted in a variety of ways, and the exhibition has been conducted in a timely manner. In FBDD (Fragment Based Drug Discovery), the combination of hardware and software was quickly agreed, and the complexity of the complex was obtained in the context of the situation. The purpose of this study is to determine the accuracy of the complex stereoscopic system in the mixed solution by using the method of rapid determination of the same concentration in the mixed solution and the rapid determination of the combination of the two components in the mixed solution. In this study, in this study, we used the method of rapid determination of the same concentration in the mixed solution of PRE, which was used to determine the accuracy of the complex system.

项目成果

Structure determinations of protein-protein complexes, on the basis of PCS derived from lanthanide tagging

基于源自镧系元素标记的 PCS 确定蛋白质-蛋白质复合物的结构

• 发表时间: 2009
• 作者: Saio T;Yokochi M;Inagaki F.;斉尾智英;Tomohide Saio;斉尾智英;斉尾智英;齋尾智英;齋尾智英;Tomohide Saio
• 通讯作者: Tomohide Saio

PCS-based structure determination of protein-protein complexes.

基于 PCS 的蛋白质-蛋白质复合物结构测定。

• DOI: 10.1007/s10858-010-9401-4
• 发表时间: 2010-04
• 期刊: Journal of biomolecular NMR
• 影响因子: 2.7
• 作者: Saio T;Yokochi M;Kumeta H;Inagaki F
• 通讯作者: Inagaki F

常磁性ランタニドプローブ法を用いた薬剤探索

使用顺磁镧系元素探针方法发现药物

• 发表时间: 2010
• 作者: Saio T;Yokochi M;Inagaki F.;斉尾智英
• 通讯作者: 斉尾智英

Paramagnetic NMR as a tool for drug discovery

顺磁核磁共振作为药物发现的工具

• 发表时间: 2010
• 作者: Saio T;Yokochi M;Inagaki F.;斉尾智英;Tomohide Saio
• 通讯作者: Tomohide Saio

NMR立体構造解析のためのタグを用いた常磁性ランタノイドプローブ

使用标签进行 NMR 构象分析的顺磁性镧系元素探针

• 发表时间: 2009
• 作者: Saio T;Yokochi M;Inagaki F.;斉尾智英;Tomohide Saio;斉尾智英;斉尾智英;齋尾智英
• 通讯作者: 齋尾智英