網膜視細胞における転写因子Otx2とCrxの機能解析

视网膜感光细胞转录因子Otx2和Crx的功能分析

• 批准号: 08J02055
• 负责人: 村西 由紀
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J02055/
• 关键词: 網膜; 転写因子; 細胞運命決定; 視細胞; 発生・分化

網膜視細胞の発生に重要な転写因子をコードするOtx2(orthodenticle homolog)およびCrx(conerod homeobox)遺伝子は、同じ視細胞前駆細胞に発現し、同じホメオドメインファミリーに属し、同じDNA結合配列をもっているにも関わらず、発現時期が約一日違うだけで別の機能をもっている。そこで、両遺伝子のプロモーター下にもう一方の遺伝子をつなげたコンストラクトをそれぞれ作製し、ノックアウトによって遺伝子が欠損しているマウスにトランスジェニックの手法を用いて導入する。これは、両蛋白質の機能は発現時期が異なっても同じ機能を持つのか、あるいは異なっているのかを動物生体内にて検討し、網膜視細胞の発生に関わる両遺伝子の機能メカニズムを明らかにしていく。この実験から、Otx2とCrxの機能の違いが両転写因子の発現するタイミングによるものか、あるいは蛋白質の違いによるものなのかを解明する。申請者は、本研究に必要なトランスジェニックマウスを作製した。Otx2のコンディショナルノックアウトマウスにOtx2プロモーター下でCrxを発現する場合、部分的な視細胞のレスキューを形態的および視細胞の成熟マーカーにて確認した。視細胞の成熟マーカーを用いた免疫染色では、桿体細胞のマーカーであるRhodopsinと錐体細胞のマーカーであるPNAの発現が部分的に認められた。一方、CrxのKOマウスに、Crxの発現に合わせてOtx2を発現させたマウス網膜から組織切片を作製し、免疫染色にて視細胞の外節が形成されているかどうかを確認したが、外節の形成は確認されなかった。よって、Otx2にはCrxの様に外節を形成し視細胞を成熟させる機能はないことが示唆された。

Otx2 (orthoditicle homolog) and Crx(conerod homobox) genes, which are important for retinal vision cell development, are present in retinal vision cells, are present in retinal vision cells, In addition to the above, the author of this article also pointed out that the author of this article is not interested in the use of the method to introduce the information of the author. The function of protein in retina is related to the development of retinal visual cells. The function of Otx2 and Crx is related to the expression of the gene. The applicant wishes to make the necessary decisions for this study. When Crx is found under the Otx2 console, the morphology of some photoreceptor cells and the maturation of photoreceptor cells are confirmed. Rhodopsin and Pyramid Cells The expression of Crx and Otx2 was detected in the retina. Tissue sections were prepared and immunostained to confirm the formation of outer segments of visual cells. Ot, Ot.