核内タンパク質の品質管理に寄与するユビキチンリガーゼの同定とその分子基盤の解析

鉴定有助于核蛋白质量控制的泛素连接酶并分析其分子基础

• 批准号: 08J03250
• 负责人: 松尾 祐児
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J03250/
• 关键词: 分裂酵母; 核内タンパク質の品質管理; ユビチキン・プロテアソーム系; Gap-repair cloning; ユビキチンリガーゼ; ユビキチン・プロテアソーム系

タンパク質の品質管理は細胞質内で機能することが一般的に知られているが、核内におけるタンパク質の品質管理の解明は大いに遅れているのが現状である。我々は昨年度の研究で分裂酵母においてこの核内におけるタンパク質品質管理機構の存在を証明し、かつ本機構に寄与するユビキチンリガーゼSan1を同定した。本年度の研究目的はこのユビキチンリガーゼSan1の選択的な基質認識の分子基盤を解析することであった。まずSan1とモデル基質である核内変異タンパク質が物理的に相互作用しているかどうかを免疫沈降法にて検証したところ、弱いながらも有意なレベルで相互作用が確認された。次に、San1の選択的な基質認識の分子基盤を解析するためSan1タンパク質ならびにモデル基質それぞれのトランケートタンパク質を作製する必要があったが、発現プラスミド上の制限酵素の制約で作製が不可能であった。そこで分裂酵母の相同組み換え活性を利用して目的のDNA断片を制限酵素に依存せず自由にプラスミド上にクローニング可能なGap-repair cloningの条件検討を行い、論文にまとめた。今後は我々が最適化したこの方法を用いてドメイン解析を行い、モデル基質とユビキチンリガーゼの相互作用ドメインを同定したい。核内タンパク質の品質管理機構は出芽酵母において初めて発見されたが、最近になってヒトの培養細胞において類似の機構の存在を強く示唆する研究結果が報告された。ヒトにおいては同機構の破綻は神経変性疾患の病因となること、分裂酵母はヒト遺伝子ライブラリーを利用したヒトの機能的オルソログ遺伝子の探索が可能であることを考えると、我々の研究で作製・開発したツールはヒトにおいて未解明である核内タンパク質の品質管理を解析する上での優れたモデル系となりうる可能性を秘めており、神経変性疾患の基盤研究として重要な知見を提供するものである。

The quality control of the nuclear system is based on the function of the cytoplasm and the status quo of the nuclear system. We have been studying the existence of a quality control mechanism in the nuclear division of yeast for the past year, and we have determined the existence of a quality control mechanism in the nuclear division. This year's research aims to analyze molecular bases for the selection of novel molecules. In addition, the interaction between nuclear and physical substances can be confirmed by immuno-sedimentation method. In addition, it is necessary to analyze the molecular matrix of San1 and San1, and it is impossible to control the restriction enzyme of San 1 and San 1. The same group of DNA fragments are used to control the enzyme activity of the split yeast, and the conditions for Gap-repair cloning are discussed. In the future, the optimization method will be used to analyze the interaction between the matrix and the substrate. The results of the study are reported in this paper. The quality control mechanism of nuclear DNA has been used to investigate the presence of similar mechanisms in budding yeast and cultured cells recently. The study on the mechanism of genetic engineering and the mechanism of genetic engineering and the mechanism of genetic engineering Basic research on mental disorders provides important insights.

项目成果

Simple and Effective Gap-Repair Cloning Using Short Tracts of Flankining Homology in Fission Yeast

利用裂变酵母中侧翼同源性短束进行简单有效的缺口修复克隆

• 发表时间: 2010
• 期刊: Bioscience.Biotechnology.Biochemistry Vol.74
• 作者: Yuzy Matsuo;Hayafumi Kishimoto;Tomitaka Horiuchi;Katsuhiro Tanae;Makoto Kawamukai
• 通讯作者: Makoto Kawamukai

MOLECULAR ANALYSIS OF NUCLEAR PROTEIN QUALITY CONTROL SYSTEM VIA UBIQU ITIN-PROTEASOME PATHWAY IN FISSION YEAST(Poster)

通过 UBIQU ITIN-蛋白酶体途径对裂殖酵母中核蛋白质量控制系统进行分子分析（海报）

• 发表时间: 2009
• 作者: Yuzy Matsuo;Hayafumi Kishimoto;Tomitaka Horiuchi;Katsuhiro Tanae;Makoto Kawamukai;松尾祐児
• 通讯作者: 松尾祐児

分裂酵母における核内タンパク質の品質管理機構の解析(口頭)

裂殖酵母核蛋白质量控制机制分析（口服）

• 发表时间: 2009
• 作者: Yuzy Matsuo;Hayafumi Kishimoto;Tomitaka Horiuchi;Katsuhiro Tanae;Makoto Kawamukai;松尾祐児;松尾祐児
• 通讯作者: 松尾祐児

分裂酵母におけるユビキチン・プロテアソーム系を介した核内タンパク質の品質管理機構の解析

裂殖酵母泛素-蛋白酶体系统介导的核蛋白质量控制机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Yuzy Matsuo;Hayafumi Kishimoto;Tomitaka Horiuchi;Katsuhiro Tanae;Makoto Kawamukai;松尾祐児;松尾祐児;松尾祐児
• 通讯作者: 松尾祐児