小胞体レドックス・シャペロンネットワークの解析

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昨年度の解析に引き続き、小胞体レドックス関連因子20種類を哺乳類培養細胞に強制発現させ、免疫沈降後に相互作用因子(Prey)をマス解析により同定したPreyの集団に対し、統計処理を行うことで、結合因子の有意性・特異性の評価を詳細に行った。さらに、統計モデルとの検証作業などにより、小胞体レドックス関連因子を中心とする小胞体因子群の全貌を有意なモデルとして提示した。変異体利用による相互作用解析から、カスケードの総体が明らかになり、下記のin vitroの実験もあわせて電子伝達系の全体像を提示した。主要な小胞体レドックスタンパク質8種類に関して、リコンビナントタンパク質を調整し、それらの生化学的解析(酸化、還元、異性化酵素活性測定、レドックスポテンシャル測定)を通して、個々の機能的特徴を洗い出した。以上の相互作用結果と生化学的特徴から、小胞体レドックス制御カスケードの全体像が予想され、そのカスケードの検証作業として、酸素電極計測による電子伝達解析、およびレドックス状態に応じた定量的相互作用計測を行った。その結果、小胞体レドックス因子の制御機構、レドックスカスケードの骨子を明らかにした。